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摘 要：本实验采用不同厂家的色谱柱对乙酰螺旋霉素原料中的单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ的进行了含量测定。方法：采用C18 色谱柱，乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2）为流动相，检测波长为232nm，流速为1.0ml/min。单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总回收率为99.5%。结论：本法简便、准确，可用于乙酰螺旋霉素原料中单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ的含量测定。采用不同厂家的色谱柱对乙酰螺旋霉素原料的测定结果无明显影响。
关键词：乙酰螺旋霉素原料；含量；测定
乙酰螺旋霉素为碱性的多组分抗生素，是单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ和双乙酰螺旋霉素Ⅲ四个组分为主的混合物。乙酰螺旋霉素适应症为适用于敏感葡萄球菌、链球菌属和肺炎链球菌所致的轻、中度感染，如咽炎、扁桃体炎、鼻窦炎、慢性支气管炎急性发作、皮肤软组织感染等，为治疗妊娠期妇女弓形体病的选用药物。本实验采用不同厂家的色谱柱对乙酰螺旋霉素原料中的单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：HWP-5实验室蒸馏水器（郑州泽铭科技有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三频恒温数控超声波清洗器（北京恒奥德仪器仪表有限公司）；赛默飞Spectronic 200可见分光光度计（百道亨仪器设备（北京）有限公司）；依利特iChrom 5100高效液相色谱仪（广州艾欣科学仪器有限公司 ）；FA1004A电子天平（成都市科恒达仪器设备有限责任公司）；WC-52B1精密恒温槽（上海思尔达科学仪器有限公司）。
1.2色谱柱：C18色谱柱（220 mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品：乙酰螺旋霉素
1.4试剂：甲醇（武汉强松精细化学品有限公司）、乙腈（永华化学科技（江苏）有限公司）、十二烷基磺酸钠（武汉强松精细化学品有限公司）、三乙胺（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸二氢钠（武汉强松精细化学品有限公司）。
2测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。流动相：乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2）为流动相，检测波长：232nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。
2.2对照品溶液的制备
精密称取乙酰螺旋霉素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取供试品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10mL，密塞，精密称定重量，超声处理5分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，滤过。取续滤液，即得。
2.4精密度试验
精密称取乙酰螺旋霉素对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为1.0mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总峰面积。结果，RSD=0.67%，表明本方法精密度良好。
2.5重现性试验
称取同一批的乙酰螺旋霉素原料样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总含量并计算样品的RSD值，结果RSD为0.72%，结果表明此方法重现性较好。
2.6准确度试验
精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入乙酰螺旋霉素对照品，按项下方法制备成120% 140%、160%。取模拟样品照试验方法试验，计算单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总回收率为99.5%， RSD为0.92%。
2.7样品稳定性试验
取同一批乙酰螺旋霉素原料样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定乙酰螺旋霉素原料中单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总峰面积的RSD=0.83%。结果表明供试品4小时内稳定。
2.8样品含量测定
依照上述含量测定方法，采用不同厂家的色谱柱测定乙酰螺旋霉素原料三批样品中单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总含量，结果表明采用不同厂家的色谱柱对乙酰螺旋霉素原料的测定结果无明显影响。
3讨论
分别考察乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2），甲醇-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2），乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（70：30）（用醋酸调PH值至7.2），乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（40：60），乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.5），乙腈-0.1%磷酸（50：50，每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g）不同比例的流动相，结果以乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2）为流动相。本实验表明此方法分离效果好、方法简便、快捷、准确，、专属性好，可用于乙酰螺旋霉素原料中乙酰螺旋霉素的含量测定。采用不同厂家的色谱柱对乙酰螺旋霉素原料的测定结果无明显影响。
參考文献：
[1]李莉，侯凤霞，李卫国.一阶导数紫外分光光度法测定乙酰螺旋霉素片剂含量[J].中国药学杂志.1994（12）
[2]李艳；闫玉华；周学东；陈连喜；；乙酰螺旋霉素/聚乳酸药膜的制备及其药物体外释放研究[A]；2000年材料科学与工程新进展（上）——2000年中国材料研讨会论文集[C]；2000年
[3]王明娟，郑超，胡昌勤，金少鸿.乙酰螺旋霉素组分分析中色谱柱的理性选择方法探讨（英文），《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》，2011年06期
[4]孙成，于如嘏，杨清华，盛曙光，赵霞芬；螺旋霉素与乙酰螺旋霉素的高效液相色谱定量分析[J]；药学学报；1987年05期
[5]严芳萍.关于中国药典（2000年版）中乙酰螺旋霉素片四组分总含量计算方法的探讨[J].中国现代应用药学.2001（S1）
关键词：乙酰螺旋霉素原料；含量；测定
乙酰螺旋霉素为碱性的多组分抗生素，是单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ和双乙酰螺旋霉素Ⅲ四个组分为主的混合物。乙酰螺旋霉素适应症为适用于敏感葡萄球菌、链球菌属和肺炎链球菌所致的轻、中度感染，如咽炎、扁桃体炎、鼻窦炎、慢性支气管炎急性发作、皮肤软组织感染等，为治疗妊娠期妇女弓形体病的选用药物。本实验采用不同厂家的色谱柱对乙酰螺旋霉素原料中的单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：HWP-5实验室蒸馏水器（郑州泽铭科技有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三频恒温数控超声波清洗器（北京恒奥德仪器仪表有限公司）；赛默飞Spectronic 200可见分光光度计（百道亨仪器设备（北京）有限公司）；依利特iChrom 5100高效液相色谱仪（广州艾欣科学仪器有限公司 ）；FA1004A电子天平（成都市科恒达仪器设备有限责任公司）；WC-52B1精密恒温槽（上海思尔达科学仪器有限公司）。
1.2色谱柱：C18色谱柱（220 mm×4.6mm，5μm）。
1.3对照品：乙酰螺旋霉素
1.4试剂：甲醇（武汉强松精细化学品有限公司）、乙腈（永华化学科技（江苏）有限公司）、十二烷基磺酸钠（武汉强松精细化学品有限公司）、三乙胺（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸二氢钠（武汉强松精细化学品有限公司）。
2测定方法确定
2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。流动相：乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2）为流动相，检测波长：232nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。
2.2对照品溶液的制备
精密称取乙酰螺旋霉素对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备
取供试品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10mL，密塞，精密称定重量，超声处理5分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，滤过。取续滤液，即得。
2.4精密度试验
精密称取乙酰螺旋霉素对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为1.0mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总峰面积。结果，RSD=0.67%，表明本方法精密度良好。
2.5重现性试验
称取同一批的乙酰螺旋霉素原料样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总含量并计算样品的RSD值，结果RSD为0.72%，结果表明此方法重现性较好。
2.6准确度试验
精密称取已知含量的样品9份，分别精密加入乙酰螺旋霉素对照品，按项下方法制备成120% 140%、160%。取模拟样品照试验方法试验，计算单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总回收率为99.5%， RSD为0.92%。
2.7样品稳定性试验
取同一批乙酰螺旋霉素原料样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10μl 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定乙酰螺旋霉素原料中单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总峰面积的RSD=0.83%。结果表明供试品4小时内稳定。
2.8样品含量测定
依照上述含量测定方法，采用不同厂家的色谱柱测定乙酰螺旋霉素原料三批样品中单乙酰螺旋霉素Ⅱ、单乙酰螺旋霉素Ⅲ、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰螺旋霉素Ⅲ总含量，结果表明采用不同厂家的色谱柱对乙酰螺旋霉素原料的测定结果无明显影响。
3讨论
分别考察乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2），甲醇-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2），乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（70：30）（用醋酸调PH值至7.2），乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（40：60），乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.5），乙腈-0.1%磷酸（50：50，每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g）不同比例的流动相，结果以乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-0.1mol/L醋酸铵溶液（60：40）（用醋酸调PH值至7.2）为流动相。本实验表明此方法分离效果好、方法简便、快捷、准确，、专属性好，可用于乙酰螺旋霉素原料中乙酰螺旋霉素的含量测定。采用不同厂家的色谱柱对乙酰螺旋霉素原料的测定结果无明显影响。
參考文献：
[1]李莉，侯凤霞，李卫国.一阶导数紫外分光光度法测定乙酰螺旋霉素片剂含量[J].中国药学杂志.1994（12）
[2]李艳；闫玉华；周学东；陈连喜；；乙酰螺旋霉素/聚乳酸药膜的制备及其药物体外释放研究[A]；2000年材料科学与工程新进展（上）——2000年中国材料研讨会论文集[C]；2000年
[3]王明娟，郑超，胡昌勤，金少鸿.乙酰螺旋霉素组分分析中色谱柱的理性选择方法探讨（英文），《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》，2011年06期
[4]孙成，于如嘏，杨清华，盛曙光，赵霞芬；螺旋霉素与乙酰螺旋霉素的高效液相色谱定量分析[J]；药学学报；1987年05期
[5]严芳萍.关于中国药典（2000年版）中乙酰螺旋霉素片四组分总含量计算方法的探讨[J].中国现代应用药学.2001（S1）