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摘 要：本文参照NY/T 1453—2007，建立了高效液相色谱-串联质谱法测定莲菜中嘧菌酯残留的检测方法。实验表明，在49.91～499.1 ng/mL范围内，嘧菌酯的峰面积与浓度线性关系良好，标准曲线方程为f（x）=6 484.72x+89 005.6，r=0.998 24，检出限为0.01 mg/kg，加标回收率为74.48%～87.65%，RSD为0.88%～3.41%，该方法精密度与稳定性良好，均符合相关标准规定，适用于莲菜中嘧菌酯残留的检测。
关键词：莲菜;嘧菌酯;高效液相色谱-串联质谱法
嘧菌酯是一种新型的人工合成仿生型内吸性杀菌剂，具有广谱、高效、低毒等优点，且与其他杀菌剂无相互抗性，被广泛用于果蔬、农作物的病害防治与储藏保鲜[1]。莲菜属于莲科水生蔬菜，兼具食药两用功效，国内多地均有栽培，深受人们的喜爱。在莲藕生长期施用嘧菌酯等农药可有效防治对其产量与品质影响最大的叶斑病，然而用药过量易造成莲藕中农药残留，对食用者身体健康与产业发展极为不利，所以有必要加强对莲菜中嘧菌酯残留风险的评估[2]。在果蔬产品嘧菌酯残留测定的常规方法中，色谱法在检测灵敏度与定性确证方面存在缺陷，液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS）灵敏度较高，定性准确，但由于不同果蔬产品试样基质效应不同，现行标准方法无法直接应用，因此，本研究参照《蔬菜及水果中多菌灵等16种农药残留测定液相色谱-质谱-质谱联用法》（NY/T 1453—2007）[3]，建立了HPLC-MS法测定莲菜中嘧菌酯残留的方法。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 材料与試剂
莲菜（购自某超市）;嘧菌酯标准溶液（BePure，批号C0007041）;甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、甲酸均为色谱纯;乙酸铵为分析纯;硅胶固相萃取小柱（500 mg/6 mL）;实验室一级超纯水。
1.1.2 仪器与设备
LC-MS-8050岛津液相色谱质谱联用仪（配ESI离子源）;ML 204T/02电子天平（精度0.000 1 g）;均质仪;高速离心机;涡旋混合器;旋转蒸发仪;氮气吹扫仪;固相萃取装置等。
1.2 试样处理方法
1.2.1 试样提取
将样品充分搅碎混匀，准确称取试样约20 g置于150 mL烧杯中，加入60 mL乙酸乙酯，使用均质仪提取2 min，用滤纸过滤收集滤液于100 mL具塞比色管中，用40 mL乙酸乙酯分3次淋洗残渣，将淋洗液收集于上述比色管中，静置10 min，待乙酸乙酯与水两相分层后，准确吸取50.0 mL乙酸乙酯层试液，在40 ℃下旋蒸浓缩近干，用氮吹仪吹干，加入2 mL丙酮+正己烷（10+90）溶解，待净化。
1.2.2 净化处理
将固相萃取柱连接到固相萃取装置，依次加入10 mL丙酮、5 mL正己烷进行预处理，将待净化试液移入固相萃取小柱中，加入5 mL丙酮+正己烷（10+90），舍弃流出液。再用20 mL甲醇+丙酮（50+50）分4次洗脱，收集洗脱液于40 ℃下旋蒸至约2 mL，用氮吹仪吹干，加入甲醇溶解定容至2 mL，上机待测。
1.3 标准溶液配制
1.3.1 标准储备液配制
准确吸取1 mL嘧菌酯标准溶液，用乙腈定容至10 mL，配制浓度为99.82 ?g/mL的标准储备液。
1.3.2 基质标准工作液配制
准确吸取0.1 mL嘧菌酯标准储备液，用甲醇定容至10 mL，配制成浓度为998.2 ng/mL的标准中间液。再使用空白样品提取液稀释配制成49.91 ng/mL、99.82 ng/mL、199.64 ng/mL、249.55 ng/mL和499.1 ng/mL的基质标准工作系列。
1.4 仪器工作条件
1.4.1 液相条件
色谱柱：YMC-Triart C18柱（100 mm×2.1 mm），柱温40 ℃;流动相：乙腈+2 mmoL/L乙酸铵溶液，流速0.20 mL/min，梯度洗脱;进样量，2 ?L。梯度洗脱程序见表1。
1.4.2 质谱条件
离子源类型：ESI离子源，温度：300 ℃;雾化器流速：3.0 L/min，干燥气流速：10 L/min;扫描方式：MRM，扫描模式，正离子。离子对详情见表2。
2 结果与分析
2.1 线性范围及检出限
将配制的基质标准工作系列在上述仪器条件下进行测定，以工作系列点质量浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。嘧菌酯在49.91～499.1 ng/mL范围内线性关系良好，线性回归方程为f（x）=6 484.72x+89 005.6，相关系数r=0.998 24。根据3倍信噪比的峰响应值计算方法检出限，得该方法的检出限为0.01 mg/kg。
2.2 方法回收率与重复性
向某阴性莲菜试样中添加检出限、限量值、10倍检出限3种浓度水平的嘧菌酯标准溶液，按照上述试样处理过程、仪器测定条件将每个浓度平行测定6次，计算加标回收率与RSD，结果见表3。该方法的回收率为74.48%～87.65%，RSD为0.88%～3.41%。
2.3 精密度与稳定性试验
取浓度为49.91 ng/mL的莲菜基质标准工作溶液，连续测定6次并记录峰面积，计算RSD为2.90%，表明该方法精密度良好。取浓度为49.91 ng/mL的莲菜基质标准工作溶液，在24 h内每隔4 h测定一次并记录峰面积，计算RSD为2.48%，表明该方法稳定性良好。
3 结论
本研究参照NY/T 1453—2007，建立了HPLC-MS法测定莲菜中嘧菌酯残留的方法，该线性关系良好，检出限、回收率、精密度及稳定性符合JJF 1317—2011[4]与GB/T 27404—2008[5]的相关要求，能够满足实验室对莲菜中嘧菌酯残留的检测需求，可为相关部门加强莲菜中嘧菌酯残留风险监测提供支持。
参考文献
[1]杜鑫，李国烈，苏旭，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定草莓中嘧菌酯的残留量[J].理化检验（化学分册），2018，54（12）：1445-1448.
[2]孙光忠，刘元明，匡辉，等.三种杀菌剂对莲藕叶斑病的田间防效[J].广西植保，2018，31（4）：6-8.
[3]中华人民共和国农业部.蔬菜及水果中多菌灵等16种农药残留测定液相色谱-质谱-质谱联用法：NY/T 1453—2007[S].北京：农业出版社，2007.
[4]国家质量监督检验检疫总局.液相色谱-质谱联用仪校准规范：JJF 1317—2011[S].北京：中国质检出版社，2011.
[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.实验室质量控制规范 食品理化检测：GB/T 27404—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.
关键词：莲菜;嘧菌酯;高效液相色谱-串联质谱法
嘧菌酯是一种新型的人工合成仿生型内吸性杀菌剂，具有广谱、高效、低毒等优点，且与其他杀菌剂无相互抗性，被广泛用于果蔬、农作物的病害防治与储藏保鲜[1]。莲菜属于莲科水生蔬菜，兼具食药两用功效，国内多地均有栽培，深受人们的喜爱。在莲藕生长期施用嘧菌酯等农药可有效防治对其产量与品质影响最大的叶斑病，然而用药过量易造成莲藕中农药残留，对食用者身体健康与产业发展极为不利，所以有必要加强对莲菜中嘧菌酯残留风险的评估[2]。在果蔬产品嘧菌酯残留测定的常规方法中，色谱法在检测灵敏度与定性确证方面存在缺陷，液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS）灵敏度较高，定性准确，但由于不同果蔬产品试样基质效应不同，现行标准方法无法直接应用，因此，本研究参照《蔬菜及水果中多菌灵等16种农药残留测定液相色谱-质谱-质谱联用法》（NY/T 1453—2007）[3]，建立了HPLC-MS法测定莲菜中嘧菌酯残留的方法。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 材料与試剂
莲菜（购自某超市）;嘧菌酯标准溶液（BePure，批号C0007041）;甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、甲酸均为色谱纯;乙酸铵为分析纯;硅胶固相萃取小柱（500 mg/6 mL）;实验室一级超纯水。
1.1.2 仪器与设备
LC-MS-8050岛津液相色谱质谱联用仪（配ESI离子源）;ML 204T/02电子天平（精度0.000 1 g）;均质仪;高速离心机;涡旋混合器;旋转蒸发仪;氮气吹扫仪;固相萃取装置等。
1.2 试样处理方法
1.2.1 试样提取
将样品充分搅碎混匀，准确称取试样约20 g置于150 mL烧杯中，加入60 mL乙酸乙酯，使用均质仪提取2 min，用滤纸过滤收集滤液于100 mL具塞比色管中，用40 mL乙酸乙酯分3次淋洗残渣，将淋洗液收集于上述比色管中，静置10 min，待乙酸乙酯与水两相分层后，准确吸取50.0 mL乙酸乙酯层试液，在40 ℃下旋蒸浓缩近干，用氮吹仪吹干，加入2 mL丙酮+正己烷（10+90）溶解，待净化。
1.2.2 净化处理
将固相萃取柱连接到固相萃取装置，依次加入10 mL丙酮、5 mL正己烷进行预处理，将待净化试液移入固相萃取小柱中，加入5 mL丙酮+正己烷（10+90），舍弃流出液。再用20 mL甲醇+丙酮（50+50）分4次洗脱，收集洗脱液于40 ℃下旋蒸至约2 mL，用氮吹仪吹干，加入甲醇溶解定容至2 mL，上机待测。
1.3 标准溶液配制
1.3.1 标准储备液配制
准确吸取1 mL嘧菌酯标准溶液，用乙腈定容至10 mL，配制浓度为99.82 ?g/mL的标准储备液。
1.3.2 基质标准工作液配制
准确吸取0.1 mL嘧菌酯标准储备液，用甲醇定容至10 mL，配制成浓度为998.2 ng/mL的标准中间液。再使用空白样品提取液稀释配制成49.91 ng/mL、99.82 ng/mL、199.64 ng/mL、249.55 ng/mL和499.1 ng/mL的基质标准工作系列。
1.4 仪器工作条件
1.4.1 液相条件
色谱柱：YMC-Triart C18柱（100 mm×2.1 mm），柱温40 ℃;流动相：乙腈+2 mmoL/L乙酸铵溶液，流速0.20 mL/min，梯度洗脱;进样量，2 ?L。梯度洗脱程序见表1。
1.4.2 质谱条件
离子源类型：ESI离子源，温度：300 ℃;雾化器流速：3.0 L/min，干燥气流速：10 L/min;扫描方式：MRM，扫描模式，正离子。离子对详情见表2。
2 结果与分析
2.1 线性范围及检出限
将配制的基质标准工作系列在上述仪器条件下进行测定，以工作系列点质量浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线。嘧菌酯在49.91～499.1 ng/mL范围内线性关系良好，线性回归方程为f（x）=6 484.72x+89 005.6，相关系数r=0.998 24。根据3倍信噪比的峰响应值计算方法检出限，得该方法的检出限为0.01 mg/kg。
2.2 方法回收率与重复性
向某阴性莲菜试样中添加检出限、限量值、10倍检出限3种浓度水平的嘧菌酯标准溶液，按照上述试样处理过程、仪器测定条件将每个浓度平行测定6次，计算加标回收率与RSD，结果见表3。该方法的回收率为74.48%～87.65%，RSD为0.88%～3.41%。
2.3 精密度与稳定性试验
取浓度为49.91 ng/mL的莲菜基质标准工作溶液，连续测定6次并记录峰面积，计算RSD为2.90%，表明该方法精密度良好。取浓度为49.91 ng/mL的莲菜基质标准工作溶液，在24 h内每隔4 h测定一次并记录峰面积，计算RSD为2.48%，表明该方法稳定性良好。
3 结论
本研究参照NY/T 1453—2007，建立了HPLC-MS法测定莲菜中嘧菌酯残留的方法，该线性关系良好，检出限、回收率、精密度及稳定性符合JJF 1317—2011[4]与GB/T 27404—2008[5]的相关要求，能够满足实验室对莲菜中嘧菌酯残留的检测需求，可为相关部门加强莲菜中嘧菌酯残留风险监测提供支持。
参考文献
[1]杜鑫，李国烈，苏旭，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定草莓中嘧菌酯的残留量[J].理化检验（化学分册），2018，54（12）：1445-1448.
[2]孙光忠，刘元明，匡辉，等.三种杀菌剂对莲藕叶斑病的田间防效[J].广西植保，2018，31（4）：6-8.
[3]中华人民共和国农业部.蔬菜及水果中多菌灵等16种农药残留测定液相色谱-质谱-质谱联用法：NY/T 1453—2007[S].北京：农业出版社，2007.
[4]国家质量监督检验检疫总局.液相色谱-质谱联用仪校准规范：JJF 1317—2011[S].北京：中国质检出版社，2011.
[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.实验室质量控制规范 食品理化检测：GB/T 27404—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.