【摘 要】
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目的 探讨补肾活血方含药血清对过氧化氢诱导大鼠髓核细胞焦亡的作用.方法 随机选取5只SD大鼠,灌胃给予3.597 g/kg补肾活血方,眼球取血,分离得含药血清;其余9只大鼠分离提取髓核细胞.用含0,5％,10％,20％,40％,80％,100％补肾活血方含药血清与髓核细胞孵育24 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定细胞活力.将髓核细胞随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)及含药血清低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组).A组加入无血清培养基;B组加入400μmol/L过氧化氢;C1组、C2
【机 构】
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湖南中医药大学第一附属医院,湖南 长沙 410007
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目的 探讨补肾活血方含药血清对过氧化氢诱导大鼠髓核细胞焦亡的作用.方法 随机选取5只SD大鼠,灌胃给予3.597 g/kg补肾活血方,眼球取血,分离得含药血清;其余9只大鼠分离提取髓核细胞.用含0,5％,10％,20％,40％,80％,100％补肾活血方含药血清与髓核细胞孵育24 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定细胞活力.将髓核细胞随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)及含药血清低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组).A组加入无血清培养基;B组加入400μmol/L过氧化氢;C1组、C2组、C3组分别预先用5％,10％,20％含药血清处理2 h,再用400μmol/L过氧化氢孵育4 h.采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定其细胞活性,采用酶联免疫吸附法测定细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)的表达水平,采用蛋白免疫印迹法测定细胞中p17、p20、半胱天冬蛋白酶1(caspase-1)、含NLR家族Pyrin域蛋白(NLRP3)、Gasdermin D(GSDMD)、Beclin 1、Rab5、Rab7、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平,采用丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别测量细胞中MDA和GSH的含量及SOD的活性.结果 与补肾活血方含药血清的培养基比较,5％,10％,20％含药血清培养基中细胞活力差异不显著(P>0.05).与B组比较,C1组、C2组、C3组细胞上清液中IL-1β和GSDMD-NT,p17,p20,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平均显著减低,MDA含量显著减少(P<0.05);与B组比较,C2组、C3组细胞上清液中SOD活性和Rab5,Rab7蛋白的表达水平均显著升高,GSH含量显著增加(P<0.05).结论 补肾活血方抑制了过氧化氢诱导大鼠髓核细胞的焦亡、NLRP3炎性小体的活化及氧化应激,促进了细胞自噬.但其物质基础复杂,主要活性成分和作用机制仍不清楚,有待进一步深入研究.
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