【摘 要】
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[目的]构建鼠Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)C端甘氨酸重复序列(氨基酸1 000~1 189)的真核表达载体,探究其与成纤维细胞(Rat-1)的相互作用。[方法]以COL1A1 c DNA为模板,PCR扩增
【机 构】
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四川大学生命科学学院,生物治疗国家重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(“Killin在p53介导肿瘤抑制上的生物学功能”;No.81171955);国家重点基础研究发展计划项目(“肿瘤发生发展中关键蛋白的功能与调控”;No.2012CB910702)
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[目的]构建鼠Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)C端甘氨酸重复序列(氨基酸1 000~1 189)的真核表达载体,探究其与成纤维细胞(Rat-1)的相互作用。[方法]以COL1A1 c DNA为模板,PCR扩增甘氨酸重复序列基因,克隆至p AP-tag4载体上得到重组质粒,命名为p AP-Gly。将p AP-Gly转染至CHO细胞,Western Blot鉴定目的蛋白。用细胞原位和定量染色及配体受体亲和印迹实验探究其与Rat-1细胞的相互作用。[结果]p AP-Gly成功构建并表达,Western Blot检测到77k Da的目的条带。AP-Gly与Rat-1的原位染色及定量染色相对OD405值(OD405=1.157±0.066)表明其能与Rat-1结合。[结论]p AP-Gly成功构建并表达,融合蛋白能和Rat-1表面相互作用,为研究Ⅰ型胶原蛋白在成纤维细胞表面上的受体复合物奠定了基础。
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