【摘 要】
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目的:以β淀粉样蛋白(amyloid β-protein 1-42,Aβ1-42)诱导的SH-SY5Y细胞为模型,探讨综合应激反应抑制剂(integrated stress response inhibitor,ISRIB)对Aβ1-42诱导的内
【机 构】
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徐州医科大学生理学系,江苏徐州221004;南京医科大学生物化学与分子生物学系,江苏南京211166;南京医科大学病理学系,江苏南京,211166;南京医科大学生物化学与分子生物学系,江苏南京,211
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目的:以β淀粉样蛋白(amyloid β-protein 1-42,Aβ1-42)诱导的SH-SY5Y细胞为模型,探讨综合应激反应抑制剂(integrated stress response inhibitor,ISRIB)对Aβ1-42诱导的内质网应激和细胞凋亡的影响.方法:SH-SY5Y细胞按不同处理方式分为4组:对照组、Aβ组、ISRIB组、ISRIB+Aβ组.培养48 h后用噻唑蓝比色法检测各组细胞存活率,蛋白免疫印迹试验检测内质网应激相关蛋白的表达,包括葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78,GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)-真核起始因子2α (eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)-活化转录因子4(activation transcription factor4,ATF4)介导的内质网应激通路,以及下游的CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP),同时也检测了凋亡相关蛋白的表达,包括Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3.结果:与Aβ组比较,ISRIB能显著提高SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.01),显著降低p-PERK(P< 0.01)、p-eIF2α(P< 0.05)、ATF4(P< 0.01)和CHOP的表达(P<0.05),提高Bcl-2/Bax表达(P<0.05),降低cleaved-caspase-3表达(P<0.01).结论:ISRIB能够抑制Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其机制与抑制ERS造成的eIF2α通路激活及其相关凋亡信号通路有关.
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