通过腺病毒介导BMP2及BMP7基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中共表达，探讨大鼠BMSCs作为基因共转移靶细胞的可行性，以及能否有效表达重组人源BMP2/7异源二聚体蛋白。
方法3只10周龄雄性Fischer大鼠，取其骨髓组织分离纯化BMSCs，并以贴壁法体外传代培养。同时构建并包装制备携带BMP2或BMP7靶基因的高滴度重组腺病毒备用。取体外培养的第3代BMSCs，按10 000个/cm2的细胞密度接种于6孔培养板，细胞贴壁培养过夜。实验组细胞加入无血清培养液稀释的携带BMP2和BMP7靶基因的腺病毒液各100 μl(病毒感染复数分别为100 MOI)，而对照组细胞加入感染复数亦为200 MOI的携带GFP基因的阴性对照腺病毒液。细胞培养第7天后，收集该条件细胞培养上清，经抗人BMP7抗体交联的G蛋白亲合层析柱滤过，以获取抗体特异性免疫蛋白沉淀，用于Western Blot及ELISA检测BMP2/7异源二聚体的有效体外表达。
结果成功构建携带有BMP2或BMP7目的基因的质粒载体并经HEK293T细胞包装成复制缺陷型重组腺病毒，Western Blot检测观察到BMP2在55 000大小处呈现有阳性目的条带，而目的基因BMP7则表现在49 000大小处有阳性条带；以阴性对照腺病毒Ad-GFP感染大鼠BMSCs 48 h，镜下见BMSCs贴壁良好，未见细胞毒性现象；荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的显著表达；腺病毒载体介导BMP2和BMP7基因共转染大鼠BMSCs 48 h后，以Western-Blot检测细胞上清液，于47 000大小处检测到表达阳性的BMP2/7异源二聚体目的条带。ELISA定量则显示重组BMP2/7异源二聚体蛋白表达量为(4.33±0.42) ng/ml，对照组为(0.08±0.02) ng/ml，经配对样本t检验，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。
结论大鼠BMSCs是腺病毒介导基因转染的有效靶细胞，腺病毒携带BMP2和BMP7靶基因在BMSCs中实现了有效共表达，且获得了较高表达水平的人源重组BMP2/7异源二聚体蛋白，为下一步研究真核细胞表达BMP2/7异源二聚体蛋白诱导大鼠骨髓间充质干细胞的体、内外成骨实验奠定了基础。