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摘 要：当前世界卫生组织已经对GMP标准作出了非常详细调查的规定，在进行高压蒸汽灭菌器验证的时候一定要对灭菌的温度、压力以及时间因素加以严格的控制。本文主要分析了GMP认证中对高压蒸汽灭菌器的验证，以供参考和借鉴。
关键词：消毒灭菌；验证；热分布；热穿透
高压蒸汽灭菌器验证是非常重要的一个内容，它在GMP认证当中也有非常详细的操作标准和执行规定，为了更好的加深GMP中对高压蒸汽灭菌验证的了解，本文结合实例对这一问题进行详细的分析。
1、概念
1.1驗证的概念
（1）WHO1992GMP的定义
能证实任何程序、生产过程、设备、物料、活动或系统确实能导致预期结果的有文件证明的行为。
（2）我国98GMP的定义
证明任何程序、生产过程、设备、物料、活动或系统确实达到预期结果的有文件证明的一系列活动。
1.2方法是指应用物理或化学等方法杀灭或除去一切存活的微生物增殖体或芽孢，使之达到无菌的方法。
（1）湿热灭菌法
物质在灭菌器内利用高压饱和蒸汽杀灭细菌。它灭菌能力强，是热力学灭菌中最有效和用途最广的方法。药品、药品的溶液、玻璃器械、培养基、无菌衣、敷料等在高温和湿热条件下不发生变化或损坏的物质，均可使用。
（2）干热灭菌法
物质在干燥空气中加热达到杀灭细菌的方法。
（3）除菌过滤法
利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理，除去对热不稳定的药品溶液或液体物质中的细菌。
（4）辐射灭菌法
将灭菌产品暴露在由放射源辐射的Y射线或适宜的电子加速器发生的射线中，达到杀灭细菌的目的。
（5）环氧乙烷灭菌法
将产品暴露在充有环氧乙烷的环境中，达到灭菌的目的。
1.3蒸汽—湿热灭菌法
如果温度已经超过了细胞的最佳活动温度，温度在升高的过程中会使得细胞代谢的速度越来越慢，细胞将不会继续生长和繁殖，每种细胞生理活动的温度都是存在着一定限制的，如果温度超过了它所能承受的限度，就会使得细胞中的蛋白质和核苷酸等物质都遭到无法逆转的破坏，这对细胞而言是毁灭性的的伤害。
因为蒸汽湿热灭菌自身存在着重现性好，对产品的保护性强等特征，所以它也被应用到了医药用品消毒的过程中。其周期设计和饱和蒸汽直接接触是有着密切联系的，饱和蒸汽是液态水处于平衡状态过程中所出现的水蒸气。所以饱和蒸汽是一种水气交界的状态，也就是说，其温度和压力都是恒定不变的。灭菌的作用主要是借助蒸汽和灭菌物品的热传递以及这一过程中所产生的冷凝水水合作用来体现的。冷凝水是蒸汽状态的水在回到液态的过程中所形成的一种水的存在形式。这种转化是需要周围环境的变化作为重要支撑的，从而也对灭菌器和灭菌的物种进行了加热处理。科学的选择蒸汽灭菌的形式可以在保证产品基本性能的基础商，确保其灭菌的效果。但是在这一过程中一定要注意的是，任何一种方式都必须要在应用前按照GMP标准加以验证。
1.4 蒸汽—湿热灭菌验证
对无菌工艺的有效性进行评价最为常用的一种方法就是借助产品的抽样对其开展无菌检验。因为微生物在产品中分布均匀性较差，同时抽检的样品数量也不是很多，所以检验的结果并不能代表所有产品的无菌水平。在国际上更加注重对无菌工艺设计合理性进行研究，其所使用的工艺和设备是否已经经过了严格的认证。在这一前提下，严格按照验证之后的工艺开展生产，从而也使得无菌工艺的可靠性得到了非常好的展现。
蒸汽—湿热灭菌验证最为关键的一个目的就是要借助必需的一些验证试验来找到充足的数据依据，这样也就充分的保证了灭菌参数的科学性，同时还能够将已经经过验证的饱和蒸汽灭菌设备和灭菌工艺参数真正的应用到药品的除菌环节，这样才能充分的展现出饱和蒸汽灭菌设备的优势及作用。同时还要对不同灭菌产品的灭菌流程以及灭菌过程中所展现出的重现性加以证明。也就是说，验证的结果一定要能够证明药品生产中经过了灭菌处理之后，残存的微生物污染率必须要在百万分之一之内。
2、对消毒灭菌设备验证的方法及实例
对某制药厂腔室容积为1.2m3的高压蒸汽灭菌器进行灭菌验证。
2.1 验证目的
灭菌器灭菌程序包括准备、升温、保温灭菌、排气冷却等几个阶段。对灭菌器的现场验证，主要目的在于确认设备内的温度、腔内压力、时间等计量参数在工作过程中的实际测量，灭菌器内的实际温度分布等。
2.2验证方法与范围
验证主要包括以下项目：
（1）消毒灭菌设备计量仪表的效验（温度表、压力表、时间计量等）
（2）热分布试验：空载热分布试验、满载热分布试验
（3）热穿透试验
2.3验证用仪器
无线测温记录仪：精度，温度优于±0？1℃；压力优于±20mbar无线测温记录仪12支，无线温度、压力记录仪1支，秒表1块。
2.4 验证校准方案的具体实施
（1）空载热分布试验
①将2支无线测温仪分别放在灭菌器温度传感器和排水口旁边。
②剩余无线测温仪分布于灭菌器内，按照不同位置和层面布置测温仪。
③进和灭菌循环试验，灭菌程序：121℃，30min，采样间隔时间5s，保持灭菌时间内每个测试点有360个读数。
④读取数据看哪个温度记录仪处于温度最低处，作为参考点，改动其他测温仪位置重复进行试验（第2次试验）。
⑤读取数据看第二次测试中哪个温度记录仪处于温度最低处，以此作为参考点，改动其他测温仪位置重复进行试验（第3次试验）。
目的：了解灭菌器腔内空载温度均匀性，找到灭菌器腔内“冷点”位置和“冷点”温度滞后时间，证明灭菌工艺达到了预计的均一性、重现性和其他性能指标。为下一步的试验提供试验依据。
（2）满载热分布试验
灭菌器内根据试验项目，进行装载后分别进行试验。
①将2支无线测温仪分别放在灭菌器温度传感器和排水口旁边。
②将待灭菌物品（1ml水针安瓿）放在灭菌器中，剩余无线测温仪分布于灭菌器内，按照不同位置和层面布置测温仪，测温仪不要与灭菌物品相接触，放置位置应包括空载试验中确定的温度最低位置。
③进行灭菌循环试验，灭菌程序：121℃，30min，采样间隔5s，保持灭菌时间内每个测试点有360个读数。
④重复进行a～c的测试试验，共做3次。
目的：确定装载方式对被灭菌品的热力学影响。
（3）热穿透试验
热穿透试验传感器位置与满载热分布放置位置相同。
①将2支无线测温仪分别放在灭菌器温度传感器和排水口旁边。
②将待灭菌物品（1ml水针安瓿）放在灭菌器中，剩余无线测温仪均匀分布到装载物中，放置位置应包括空载试验中确定的温度最低位置。
③进行灭菌循环试验，灭菌程序：121℃，30min，采样间隔时间3s，保持灭菌时间内每个测试点有360个读数。
④可放置其他不同式样，重复进行a～c的测试试验，共做3次。
2.5验证校准的结果分析
在研究和试验当中总结分析得出，在装载方式和蒸汽源压力在特定的条件下是需要满载热分布和热穿透试验的协调时间都要比空载热分布试验的协调时间更长，但是满载热分布和热穿透力试验由于多种因素的影响，灭菌的时间之内，温度的变化要比空载热分布试验的温度变化小。
3、结语
在本文当中，我们对GMP验证当中对高压蒸汽灭菌验证的几种方法进行了简单的阐述，同时结合实例进行了分析，希望能够给相关人员提供一定的参考，为类似的工作提供一些经验。
参考文献：
[1]雷敏娟.高分子材料医疗器械的灭菌方法研究进展[J].广东化工.2015（13）
[2]朱炜，张道隽.高温高压灭菌器校准方法的研究[J].工业计量.2012（05）
关键词：消毒灭菌；验证；热分布；热穿透
高压蒸汽灭菌器验证是非常重要的一个内容，它在GMP认证当中也有非常详细的操作标准和执行规定，为了更好的加深GMP中对高压蒸汽灭菌验证的了解，本文结合实例对这一问题进行详细的分析。
1、概念
1.1驗证的概念
（1）WHO1992GMP的定义
能证实任何程序、生产过程、设备、物料、活动或系统确实能导致预期结果的有文件证明的行为。
（2）我国98GMP的定义
证明任何程序、生产过程、设备、物料、活动或系统确实达到预期结果的有文件证明的一系列活动。
1.2方法是指应用物理或化学等方法杀灭或除去一切存活的微生物增殖体或芽孢，使之达到无菌的方法。
（1）湿热灭菌法
物质在灭菌器内利用高压饱和蒸汽杀灭细菌。它灭菌能力强，是热力学灭菌中最有效和用途最广的方法。药品、药品的溶液、玻璃器械、培养基、无菌衣、敷料等在高温和湿热条件下不发生变化或损坏的物质，均可使用。
（2）干热灭菌法
物质在干燥空气中加热达到杀灭细菌的方法。
（3）除菌过滤法
利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理，除去对热不稳定的药品溶液或液体物质中的细菌。
（4）辐射灭菌法
将灭菌产品暴露在由放射源辐射的Y射线或适宜的电子加速器发生的射线中，达到杀灭细菌的目的。
（5）环氧乙烷灭菌法
将产品暴露在充有环氧乙烷的环境中，达到灭菌的目的。
1.3蒸汽—湿热灭菌法
如果温度已经超过了细胞的最佳活动温度，温度在升高的过程中会使得细胞代谢的速度越来越慢，细胞将不会继续生长和繁殖，每种细胞生理活动的温度都是存在着一定限制的，如果温度超过了它所能承受的限度，就会使得细胞中的蛋白质和核苷酸等物质都遭到无法逆转的破坏，这对细胞而言是毁灭性的的伤害。
因为蒸汽湿热灭菌自身存在着重现性好，对产品的保护性强等特征，所以它也被应用到了医药用品消毒的过程中。其周期设计和饱和蒸汽直接接触是有着密切联系的，饱和蒸汽是液态水处于平衡状态过程中所出现的水蒸气。所以饱和蒸汽是一种水气交界的状态，也就是说，其温度和压力都是恒定不变的。灭菌的作用主要是借助蒸汽和灭菌物品的热传递以及这一过程中所产生的冷凝水水合作用来体现的。冷凝水是蒸汽状态的水在回到液态的过程中所形成的一种水的存在形式。这种转化是需要周围环境的变化作为重要支撑的，从而也对灭菌器和灭菌的物种进行了加热处理。科学的选择蒸汽灭菌的形式可以在保证产品基本性能的基础商，确保其灭菌的效果。但是在这一过程中一定要注意的是，任何一种方式都必须要在应用前按照GMP标准加以验证。
1.4 蒸汽—湿热灭菌验证
对无菌工艺的有效性进行评价最为常用的一种方法就是借助产品的抽样对其开展无菌检验。因为微生物在产品中分布均匀性较差，同时抽检的样品数量也不是很多，所以检验的结果并不能代表所有产品的无菌水平。在国际上更加注重对无菌工艺设计合理性进行研究，其所使用的工艺和设备是否已经经过了严格的认证。在这一前提下，严格按照验证之后的工艺开展生产，从而也使得无菌工艺的可靠性得到了非常好的展现。
蒸汽—湿热灭菌验证最为关键的一个目的就是要借助必需的一些验证试验来找到充足的数据依据，这样也就充分的保证了灭菌参数的科学性，同时还能够将已经经过验证的饱和蒸汽灭菌设备和灭菌工艺参数真正的应用到药品的除菌环节，这样才能充分的展现出饱和蒸汽灭菌设备的优势及作用。同时还要对不同灭菌产品的灭菌流程以及灭菌过程中所展现出的重现性加以证明。也就是说，验证的结果一定要能够证明药品生产中经过了灭菌处理之后，残存的微生物污染率必须要在百万分之一之内。
2、对消毒灭菌设备验证的方法及实例
对某制药厂腔室容积为1.2m3的高压蒸汽灭菌器进行灭菌验证。
2.1 验证目的
灭菌器灭菌程序包括准备、升温、保温灭菌、排气冷却等几个阶段。对灭菌器的现场验证，主要目的在于确认设备内的温度、腔内压力、时间等计量参数在工作过程中的实际测量，灭菌器内的实际温度分布等。
2.2验证方法与范围
验证主要包括以下项目：
（1）消毒灭菌设备计量仪表的效验（温度表、压力表、时间计量等）
（2）热分布试验：空载热分布试验、满载热分布试验
（3）热穿透试验
2.3验证用仪器
无线测温记录仪：精度，温度优于±0？1℃；压力优于±20mbar无线测温记录仪12支，无线温度、压力记录仪1支，秒表1块。
2.4 验证校准方案的具体实施
（1）空载热分布试验
①将2支无线测温仪分别放在灭菌器温度传感器和排水口旁边。
②剩余无线测温仪分布于灭菌器内，按照不同位置和层面布置测温仪。
③进和灭菌循环试验，灭菌程序：121℃，30min，采样间隔时间5s，保持灭菌时间内每个测试点有360个读数。
④读取数据看哪个温度记录仪处于温度最低处，作为参考点，改动其他测温仪位置重复进行试验（第2次试验）。
⑤读取数据看第二次测试中哪个温度记录仪处于温度最低处，以此作为参考点，改动其他测温仪位置重复进行试验（第3次试验）。
目的：了解灭菌器腔内空载温度均匀性，找到灭菌器腔内“冷点”位置和“冷点”温度滞后时间，证明灭菌工艺达到了预计的均一性、重现性和其他性能指标。为下一步的试验提供试验依据。
（2）满载热分布试验
灭菌器内根据试验项目，进行装载后分别进行试验。
①将2支无线测温仪分别放在灭菌器温度传感器和排水口旁边。
②将待灭菌物品（1ml水针安瓿）放在灭菌器中，剩余无线测温仪分布于灭菌器内，按照不同位置和层面布置测温仪，测温仪不要与灭菌物品相接触，放置位置应包括空载试验中确定的温度最低位置。
③进行灭菌循环试验，灭菌程序：121℃，30min，采样间隔5s，保持灭菌时间内每个测试点有360个读数。
④重复进行a～c的测试试验，共做3次。
目的：确定装载方式对被灭菌品的热力学影响。
（3）热穿透试验
热穿透试验传感器位置与满载热分布放置位置相同。
①将2支无线测温仪分别放在灭菌器温度传感器和排水口旁边。
②将待灭菌物品（1ml水针安瓿）放在灭菌器中，剩余无线测温仪均匀分布到装载物中，放置位置应包括空载试验中确定的温度最低位置。
③进行灭菌循环试验，灭菌程序：121℃，30min，采样间隔时间3s，保持灭菌时间内每个测试点有360个读数。
④可放置其他不同式样，重复进行a～c的测试试验，共做3次。
2.5验证校准的结果分析
在研究和试验当中总结分析得出，在装载方式和蒸汽源压力在特定的条件下是需要满载热分布和热穿透试验的协调时间都要比空载热分布试验的协调时间更长，但是满载热分布和热穿透力试验由于多种因素的影响，灭菌的时间之内，温度的变化要比空载热分布试验的温度变化小。
3、结语
在本文当中，我们对GMP验证当中对高压蒸汽灭菌验证的几种方法进行了简单的阐述，同时结合实例进行了分析，希望能够给相关人员提供一定的参考，为类似的工作提供一些经验。
参考文献：
[1]雷敏娟.高分子材料医疗器械的灭菌方法研究进展[J].广东化工.2015（13）
[2]朱炜，张道隽.高温高压灭菌器校准方法的研究[J].工业计量.2012（05）