【摘 要】
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大豆异黄酮是有助于人类身体健康的一类次级代谢产物,大豆查尔酮还原酶(chalcone reductase,CHR)基因是控制大豆异黄酮主要组分大豆苷元生物合成的关键酶之一。为拓宽大豆CHR研究范围,促进异黄酮代谢机理研究,进而促进大豆品种改良,本研究利用基因工程技术对大豆CHR2-1进行基因克隆及生物信息学分析,并且构建重组植物表达载体pCAMBIA3301-CHR2-1,通过农杆菌介导法将目的基
【基金项目】
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国家自然基金青年科学基金(31801381); 吉林省教育厅“十三五”科学技术项目(JJKH20190935KJ);
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大豆异黄酮是有助于人类身体健康的一类次级代谢产物,大豆查尔酮还原酶(chalcone reductase,CHR)基因是控制大豆异黄酮主要组分大豆苷元生物合成的关键酶之一。为拓宽大豆CHR研究范围,促进异黄酮代谢机理研究,进而促进大豆品种改良,本研究利用基因工程技术对大豆CHR2-1进行基因克隆及生物信息学分析,并且构建重组植物表达载体pCAMBIA3301-CHR2-1,通过农杆菌介导法将目的基因整合到东农50大豆受体基因组中,PCR筛选鉴定获得大豆转化植株。研究结果表明:GmCHR2-1基因编码的蛋白属于非分泌型蛋白,可能在细胞质中发挥主要功能,属于非跨膜类蛋白并不在细胞中发生迁移;该蛋白存在22个潜在磷酸化位点,其中酪氨酸(Tyr)0个、苏氨酸(Thr)4个、丝氨酸(Ser)18个;该蛋白由α-螺旋(40.63%)、延伸链(14.29%)、β-转角(4.13%)和无规则卷曲(40.95%)4个部分组成。PCR鉴定表明,转化植株基因组包含抗草丁膦抗性基因Bar、终止子NOS和启动子35S位点,初步确定已将GmCHR2-1转入到东农50大豆品种基因组中,并获得T2阳性植株转化苗12株。
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