【摘 要】
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利用PCR技术,将胰岛素原基因中A6和A11的Cys序列突变成Ala序列,以去除A链的链内;硫键.突变基因连接到质粒pBV220,构建了表达质粒pJG403,并且在大肠肝菌中得到表达.经过S印had
【机 构】
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北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室
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利用PCR技术,将胰岛素原基因中A6和A11的Cys序列突变成Ala序列,以去除A链的链内;硫键.突变基因连接到质粒pBV220,构建了表达质粒pJG403,并且在大肠肝菌中得到表达.经过S印hadexG-50层析可得到纯化的突变人胰岛素原(Mut-HPI-Ala).纯化产物用胰蛋白酶和羧肽酶处理,并经ResourceQ阴离子交换柱层析可进一步获得纯化的突变人胰岛素(Mut-HI-Ala).Native-PAGE分析表明Mut-HI-Ala的结构松散.Mut-HPI-Ala的放射免疫活性和胰岛素受体结合活性是非突变人胰岛素原(Met-HPI)的4.6%和2.4%.Mut-HI-Ala的放射免疫活性和胰岛素受体结合活性是非突变人胰岛素(Met-HI)的4.3%和4.6%.实验结果表明,胰岛素A链内的二硫键对胰岛素的生物活性起着重要的作用.
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