原发性肝癌survivin基因表达及靶向survivin治疗

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目的:研究原发性肝癌survivin基因表达及治疗靶点作用.方法:收集肝癌和癌旁组织40例.Western blot法检测survivin蛋白表达,RT-PCR法检测survivin mRNA.原位末端标记法检测组织凋亡指数.设计合成survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AS ODN)转染hepG2细胞,设置空白对照组、脂质体组、正义链组和各浓度AS ODN组.流式细胞术检测凋亡指数,MTT法检测化疗药物对细胞生长抑制率.建立原位荷肝癌鼠模型并分为3组:反义survivin链组、空白对照组及脂质体组.V=ab2/2计算肿瘤体积,以V治疗后/V治疗前×100%计算生长指数.结果:肝癌细胞株和34/40例肝癌组织表达survivin蛋白及mRNA,癌旁组织无surviyin表达.肝内转移组(93.5%)和门静脉癌栓组(92.8%)survivin蛋白表达阳性率显著高于阴性组(55.6%)和无癌栓组(66.7%)(P<0.05).肝内转移组(1.105±0.396)和门静脉癌栓组(1.137±0.404)survivin mRNA水平显著高于阴性组(0.572±0.082)和无癌栓组(0.627±0.122)(P<0.05).Survivin阳性组织凋亡指数为1.15±0.33%,显著低于阴性组(4.50±0.83%)(P=0.00002).AS ODN组survivin表达减弱,凋亡指数增高,200nmol/L组为10.50±0.76%,400nmol/L组为12.99±0.42%,600 nmol/L组为22.21±1.26%,明显高于对照组(P<0.05).化疗药物对ASODN组生长抑制率增高,200 nmo1/L组为47.7±4.6%(5-FU)、59.7±3.5%(DDP),400 nmol/L组为56.8±4.0%(5-FU)、68.2±2.1%(DDP),600nmol/L组为85.2±2.3%(5-FU)、79.9±3.7%(DDP),明显高于对照组(P<0.05).23/25裸鼠成功建立原位荷肝癌动物模型.AS ODN组肿瘤生长指数为51.0±24.2%,显著低于空白对照组(70.2±23.4%)和脂质体组(168.0±28.6%)(P<0.05).AS ODN组凋亡指数为21.97±2.11%,显著高于空白对照组(3.21±0.57%)和脂质体组(3.07±0.81%)(P<0.05).结论:survivin在HCC发生中有重要作用.survivin ASODN转染能下调survivin表达,诱导细胞凋亡,增加HCC细胞对化疗药物敏感性.survivin AS ODN对荷HCC鼠有一定治疗作用.
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