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【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2013）11-0431-01
【摘 要】本研究建立了一种测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B的含量的高效液相色谱方法（HPLC）。主要方法为色谱柱岛津C18反相柱（5μm，100A250mm×46mm）；柱溫度30摄氏度；紫外检测器；流动相： 甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；流量：1.0mL/min；检测波长286nm；进样量20μl。结果表明，丹参多酚酸盐中丹酚酸B的平均含量0.8181mg/ml，加样提取平均回收率为99. 03%，符合分析实验要求。该方法结果稳定，简单可靠且重复性好，可广泛应用于丹参多酚酸盐中丹酚酸B的含量的测定。
【关键词】高效液相色谱法；丹参多酚酸盐；丹酚酸B；含量测定
注射用丹参多酚酸盐属于中药处方药，其80%为丹参乙酸镁。临床上用于治疗心绞痛、冠心病和心血管内科病等疾病[1-2]，具有通脉养心、活血化瘀、养血安神、活血消肿等功效。 注射用丹参多酚酸盐的主要的活性成分丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸、异阿魏酸、紫草酸以及丹酚酸A、B、C、E等。注射用丹参多酚酸盐的质量控制主要是以酚酸B的含量作为质控指标[3-5]。目前，还未见对注射用丹参多酚酸盐的丹酚酸B活性成分含量控制的报道。本文建立了高效液相色谱法测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B含量的方法， 用以测定该药品的质量。
一、试验器材与方法
1.试验仪器与试剂
岛津高效液相色谱仪（LC-15C，四元泵，氘灯监测，可控温度，C18色谱柱） ；注射用丹参多酚酸盐（生产厂家：上海绿谷制药有限公司，规格：每瓶装量50mg，批号：13032821）；丹酚酸B标准品 （中国药品生物制品检定所提供，批号：111562-200302）；甲醇、乙腈为色谱纯（国药）；水为重蒸馏水；甲酸为分析纯（国药）。
2.色谱分析条件
C18反相柱（5μm，100A250mm×46mm）；柱温度30摄氏度；紫外检测器；流动相： 甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；流量：1.0mL/min；检测波长286nm； 进样量20μl。
3.试验方法
（1） 溶液的配制
1）标准品品溶液的配制
精密称取丹酚酸B标准品5mg，定量于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀后精密量取5ml溶液置于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀，既得10mg/L的标准品溶液。
2） 供试品溶液的配制
精密称取注液用丹参多酚酸盐5mg，定量于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀，即得供试品溶液。
3） 对照品溶液的制备
将2）中的丹参多酚酸盐换为等量的纯水，配置方法与2）相同。
（2） 检测方法
设置好色谱条件后，吸取过微滤膜的上述溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，进行色谱分析，采用外标法以峰面积计算样品的含量，重复5次。
（3）标准曲线的制备
精密量取10、20、 40、 80、 100μl 的10mg/L的丹酚酸B标准品溶液，置于5个1ml离心管中，用纯水定量到1ml，混匀后过微滤膜，然后分别进样，根据色谱图，以色谱峰面积对成分浓度作回归统计。
（4）丹酚酸B含量试验
丹酚酸B供试品溶液和对照品溶液的过微滤膜后，分别进样，按上述方法操作重复6次，测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B的含量。
（5） 加样回收率试验
取丹酚酸B供试品溶液10ml，共6份，分别加入丹酚酸B标准品适量，精按含量测定方法测定最终丹酚酸B的含量，进行回收率计算。
二、结果
（1）丹酚酸B含量测定结果
根据（2）的方法，测得丹酚酸B的含量见表1。
（2）加样回收率试验结果
丹酚酸B加样回收率试验结果见表2，从表2中可以看出，丹酚酸B的回收率为99.03%，符合分析要求。
三、讨论
（1）色谱条件的选择
在2005版《中国药典》中，丹参片质量标准测定的色谱条件为C18反相硅胶柱，流动相根据实际情况来定，通过多次试验发现，甲醇、乙腈为色谱纯（国药）、甲酸、水为重蒸馏水（30：10：1：59）的条件下，分离效果最好，而且流动相中存有甲酸时的柱峰形明显优于无甲酸的峰形， 因此，确定高效液相色谱分析注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B含量测定的流动相为甲醇、乙腈为色谱纯（国药）、甲酸、水为重蒸馏水=30：10：1：59。
（2）丹参多酚酸盐中丹酚酸B研究小结
注射用丹参多酚酸盐的主要活性成分是水溶性成分，如果以药材的投入量来控制药品质量，会因为药材品种、产地以及加工条件等的不同而受到很大的影响，最终导致药品中有效成分的含量不确定。目前，关于注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B的质控标准未见报道，本文建立了测定丹酚酸B的反相高效液相色谱法。从测定结果看，此法操作简便、灵敏度高、结果准确，可用于丹参多酚酸盐中丹酚酸B的测定。
参考文献
[1] 税丕先庄元春，何兵，等.高效液相色谱测定丹参滴注液中丹酚酸B含量[J].时针国医国药，2009，20（03）：671-672.
[2] 郑虎占.中药现代研究与应用[M].第二卷.北京：学苑出版社，1997：1099.
[3] 曹冬，黄喜茹，王伟，等.反相高效液相色谱法测定丹参滴注液中丹参素和原儿茶醛[J].中南药学，2006，4（02）：121-123.
[4] 张雪，褚文静，刘伟娜，等.高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定丹参滴注液中四种水溶性成分的含量[J].分析科学学报，2010，26（01）：109-112.
[5] 朱立彬，吴志明，何明三.HPLC法测定丹参药材中丹参素的含量[J].湖北中医学院学报，2004，6（3）：33-34.
[6] 李红磊，张忠义，胡玉佳，等.香丹注射液中丹酚酸B的HPLC法测定[J].分析测试学报，2005，24（11）：128.
【摘 要】本研究建立了一种测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B的含量的高效液相色谱方法（HPLC）。主要方法为色谱柱岛津C18反相柱（5μm，100A250mm×46mm）；柱溫度30摄氏度；紫外检测器；流动相： 甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；流量：1.0mL/min；检测波长286nm；进样量20μl。结果表明，丹参多酚酸盐中丹酚酸B的平均含量0.8181mg/ml，加样提取平均回收率为99. 03%，符合分析实验要求。该方法结果稳定，简单可靠且重复性好，可广泛应用于丹参多酚酸盐中丹酚酸B的含量的测定。
【关键词】高效液相色谱法；丹参多酚酸盐；丹酚酸B；含量测定
注射用丹参多酚酸盐属于中药处方药，其80%为丹参乙酸镁。临床上用于治疗心绞痛、冠心病和心血管内科病等疾病[1-2]，具有通脉养心、活血化瘀、养血安神、活血消肿等功效。 注射用丹参多酚酸盐的主要的活性成分丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸、异阿魏酸、紫草酸以及丹酚酸A、B、C、E等。注射用丹参多酚酸盐的质量控制主要是以酚酸B的含量作为质控指标[3-5]。目前，还未见对注射用丹参多酚酸盐的丹酚酸B活性成分含量控制的报道。本文建立了高效液相色谱法测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B含量的方法， 用以测定该药品的质量。
一、试验器材与方法
1.试验仪器与试剂
岛津高效液相色谱仪（LC-15C，四元泵，氘灯监测，可控温度，C18色谱柱） ；注射用丹参多酚酸盐（生产厂家：上海绿谷制药有限公司，规格：每瓶装量50mg，批号：13032821）；丹酚酸B标准品 （中国药品生物制品检定所提供，批号：111562-200302）；甲醇、乙腈为色谱纯（国药）；水为重蒸馏水；甲酸为分析纯（国药）。
2.色谱分析条件
C18反相柱（5μm，100A250mm×46mm）；柱温度30摄氏度；紫外检测器；流动相： 甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；流量：1.0mL/min；检测波长286nm； 进样量20μl。
3.试验方法
（1） 溶液的配制
1）标准品品溶液的配制
精密称取丹酚酸B标准品5mg，定量于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀后精密量取5ml溶液置于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀，既得10mg/L的标准品溶液。
2） 供试品溶液的配制
精密称取注液用丹参多酚酸盐5mg，定量于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀，即得供试品溶液。
3） 对照品溶液的制备
将2）中的丹参多酚酸盐换为等量的纯水，配置方法与2）相同。
（2） 检测方法
设置好色谱条件后，吸取过微滤膜的上述溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，进行色谱分析，采用外标法以峰面积计算样品的含量，重复5次。
（3）标准曲线的制备
精密量取10、20、 40、 80、 100μl 的10mg/L的丹酚酸B标准品溶液，置于5个1ml离心管中，用纯水定量到1ml，混匀后过微滤膜，然后分别进样，根据色谱图，以色谱峰面积对成分浓度作回归统计。
（4）丹酚酸B含量试验
丹酚酸B供试品溶液和对照品溶液的过微滤膜后，分别进样，按上述方法操作重复6次，测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B的含量。
（5） 加样回收率试验
取丹酚酸B供试品溶液10ml，共6份，分别加入丹酚酸B标准品适量，精按含量测定方法测定最终丹酚酸B的含量，进行回收率计算。
二、结果
（1）丹酚酸B含量测定结果
根据（2）的方法，测得丹酚酸B的含量见表1。
（2）加样回收率试验结果
丹酚酸B加样回收率试验结果见表2，从表2中可以看出，丹酚酸B的回收率为99.03%，符合分析要求。
三、讨论
（1）色谱条件的选择
在2005版《中国药典》中，丹参片质量标准测定的色谱条件为C18反相硅胶柱，流动相根据实际情况来定，通过多次试验发现，甲醇、乙腈为色谱纯（国药）、甲酸、水为重蒸馏水（30：10：1：59）的条件下，分离效果最好，而且流动相中存有甲酸时的柱峰形明显优于无甲酸的峰形， 因此，确定高效液相色谱分析注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B含量测定的流动相为甲醇、乙腈为色谱纯（国药）、甲酸、水为重蒸馏水=30：10：1：59。
（2）丹参多酚酸盐中丹酚酸B研究小结
注射用丹参多酚酸盐的主要活性成分是水溶性成分，如果以药材的投入量来控制药品质量，会因为药材品种、产地以及加工条件等的不同而受到很大的影响，最终导致药品中有效成分的含量不确定。目前，关于注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B的质控标准未见报道，本文建立了测定丹酚酸B的反相高效液相色谱法。从测定结果看，此法操作简便、灵敏度高、结果准确，可用于丹参多酚酸盐中丹酚酸B的测定。
参考文献
[1] 税丕先庄元春，何兵，等.高效液相色谱测定丹参滴注液中丹酚酸B含量[J].时针国医国药，2009，20（03）：671-672.
[2] 郑虎占.中药现代研究与应用[M].第二卷.北京：学苑出版社，1997：1099.
[3] 曹冬，黄喜茹，王伟，等.反相高效液相色谱法测定丹参滴注液中丹参素和原儿茶醛[J].中南药学，2006，4（02）：121-123.
[4] 张雪，褚文静，刘伟娜，等.高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定丹参滴注液中四种水溶性成分的含量[J].分析科学学报，2010，26（01）：109-112.
[5] 朱立彬，吴志明，何明三.HPLC法测定丹参药材中丹参素的含量[J].湖北中医学院学报，2004，6（3）：33-34.
[6] 李红磊，张忠义，胡玉佳，等.香丹注射液中丹酚酸B的HPLC法测定[J].分析测试学报，2005，24（11）：128.