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摘要：目的：研究可博利口服液的澄清工艺。方法：以两种不同工艺配制制剂，比较总固体物含量，并采用正交试验法，以冬虫夏草多糖含量及总固体物含量为指标，优选澄清工艺，再进行稳定性考察的比较。结果：壳聚糖澄清工艺的总固体物含量比原工艺高14.7%，优选的澄清工艺为药液温度50℃、药液浓度（g∶ml）=1∶4、1%壳聚糖的用量为3%（W/W）。结论：本实验简化了壳聚糖澄清工艺，使有效成分的总保留量得到提高，且制剂稳定。
关键词：冬虫夏草多糖;正交试验法;壳聚糖
可博利口服液，主要由冬虫夏草菌丝体、脂质体浓缩液等组成，是一种通过脂质体包封冬虫夏草菌丝体中的多糖而制成的靶向制剂，具有免疫调节功能。由于我院一直以来采取的是传统澄清工艺水提醇沉法，所以存在中药总固体物及有效成分损失严重、生产成本高、成品稳定性差、生产周期长等诸多问题。吸附澄清技术近年来开始应用于中药口服液生产工艺中，对中药制剂的澄清工艺具有独特的优势[1]。本实验通过正交试验法，以冬虫夏草多糖含量及总固体物含量为指标，对影响澄清工艺的三个主要因素，即壳聚糖的用量、药液浓度、药液温度进行优选，再进行为期12个月的稳定性考察，并与原澄清工艺比较，以確定可博利口服液最佳澄清工艺。
1 仪器与材料
UV-1100紫外分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）;TG-328A电光分析天平（上海天平仪器厂）;壳聚糖（上海伟康生物制品有限公司）;D-葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所）。
2 方法与结果
2.1 水提醇沉工艺与澄清工艺比较
2.1.1水提醇沉工艺（Ⅰ）将冬虫夏草菌丝体烘干后，用水煎煮2次，合并水煎液，过滤，浓缩，浓缩液（生药∶水=1∶4）加入60%乙醇，搅匀，放置24 h，过滤，滤液加热回收乙醇，加入脂质体浓缩液、蒸馏水及其他辅料等，抽滤，滤液补加蒸馏水至规定量，灌封，灭菌。
2.1.2壳聚糖澄清工艺（Ⅱ）在水煎液过滤浓缩（生药∶水=1∶4）后，加入天然澄清剂1%壳聚糖溶液（W/W）（以1%的醋酸溶液配成），搅匀，放置24 h，过滤，加入脂质体浓缩液、蒸馏水及其他辅料等，抽滤，滤液补加蒸馏水至规定量，灌封，灭菌。
2.2 总固体物含量测定
分别精密吸取定容后的两组工艺的药液10 ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，烘箱105℃恒温1.5 h，置干燥器中冷却20 min，迅速称重，计算总固体物含量为：工艺（Ⅰ）108.6 mg/ml，工艺（Ⅱ）123.3 mg/ml。两组工艺总固体物含量相差14.7%，说明壳聚糖吸附澄清作用影响了该制剂的有效成分总含量。
2.3 冬虫夏草多糖浓度测定
2.3.1 对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品10.0 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3.2 最大吸收波长的确定根据文献方法[2]，精密吸取葡萄糖对照品溶液和样品溶液各1.0 ml，分别加入蒽酮-硫酸试液2.0 ml，摇匀。置沸水浴中加热5 min，取出放至室温，20 min后以水1.0 ml加2.0 ml显色剂为空白，在550～700 nm波长范围内扫描。结果表明，对照品溶液和样品溶液的最大吸收波长为625 nm。
2.3.3 标准曲线的制备精密吸取葡萄糖对照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加水定容至刻度，分别吸取1.0 ml，置5支具塞试管中，按上述方法操作，在625 nm波长处测定吸收度。以吸收度（A）对浓度（C）进行回归，求得线性回归方程：A=4.02×10-2C-1.65×10-5，r=0.990 2。结果葡萄糖在3.3～9.9 μg/ml范围内有良好的线性关系。
2.3.4 对照品的稳定性试验 照“2.3.3”项下方法，取对照品溶液显色后，在室温下放置，每隔10 min测定吸收度。结果表明，对照品溶液显色后在60 min内吸收度基本保持不变，RSD=2.19%。
2.3.5 多糖的含量测定精密吸取样品1.0 ml，置100 ml量瓶中，加水定容至刻度，作为样品溶液。精密吸取1.0 ml，测定吸收度，计算样品中冬虫夏草多糖的总含量。
2.4正交试验法优选澄清工艺
根据壳聚糖本身的特点及实际应用的情况，确定影响制剂澄清效果的因素，并用L9（34）正交法进行试验，结果见表1（略），表2（略）。
从以上试验优选结果，选择A3B3C2，即加入时药液温度50℃、药液浓度（g∶ml）=1∶4、1%壳聚糖的用量（W/W）3%时，澄清效果最好。
2.5稳定性考察
将两种工艺配制的口服液室温放置12个月，分别在0，3，6，12月四个时段观察澄清度和色泽。原工艺配制的口服液在3～6个月时有絮状物悬浮（摇后即散），澄清工艺配制的口服液絮状物不明显，色泽均棕色。
3 讨论
上述实验结果表明，使用壳聚糖澄清剂用于可博利口服液的澄清效果比传统的水提醇沉工艺好，不仅简化了工艺，总固体物含量也高于原工艺，文献报道[3]壳聚糖除杂较水提醇沉能明显提高多糖和有机酸的含量，因此，使用壳聚糖能使可博利口服液中多糖等有效成分的总保留量得到提高，保证了成品的内在质量。在为期12个月的稳定性考察过程中，两种工艺配制的口服液均相对稳定。
参考文献：
[1]周进东，罗兴洪，刘武.中药口服液的纯化与口感探讨[J].中医药研究，2001，17（3）：42-44.
[2]冯祚臻，官东秀，张晓婷.冬虫夏草多糖脂质体口服液的质量标准[J].沈阳药科大学学报，2005，22（3）：203-205.
[3]张彤，徐莲英，陶建生，等.壳聚糖用于部分单味中药浸提液澄清效果的研究[J].中草药，1999，30（10）：744.
关键词：冬虫夏草多糖;正交试验法;壳聚糖
可博利口服液，主要由冬虫夏草菌丝体、脂质体浓缩液等组成，是一种通过脂质体包封冬虫夏草菌丝体中的多糖而制成的靶向制剂，具有免疫调节功能。由于我院一直以来采取的是传统澄清工艺水提醇沉法，所以存在中药总固体物及有效成分损失严重、生产成本高、成品稳定性差、生产周期长等诸多问题。吸附澄清技术近年来开始应用于中药口服液生产工艺中，对中药制剂的澄清工艺具有独特的优势[1]。本实验通过正交试验法，以冬虫夏草多糖含量及总固体物含量为指标，对影响澄清工艺的三个主要因素，即壳聚糖的用量、药液浓度、药液温度进行优选，再进行为期12个月的稳定性考察，并与原澄清工艺比较，以確定可博利口服液最佳澄清工艺。
1 仪器与材料
UV-1100紫外分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）;TG-328A电光分析天平（上海天平仪器厂）;壳聚糖（上海伟康生物制品有限公司）;D-葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所）。
2 方法与结果
2.1 水提醇沉工艺与澄清工艺比较
2.1.1水提醇沉工艺（Ⅰ）将冬虫夏草菌丝体烘干后，用水煎煮2次，合并水煎液，过滤，浓缩，浓缩液（生药∶水=1∶4）加入60%乙醇，搅匀，放置24 h，过滤，滤液加热回收乙醇，加入脂质体浓缩液、蒸馏水及其他辅料等，抽滤，滤液补加蒸馏水至规定量，灌封，灭菌。
2.1.2壳聚糖澄清工艺（Ⅱ）在水煎液过滤浓缩（生药∶水=1∶4）后，加入天然澄清剂1%壳聚糖溶液（W/W）（以1%的醋酸溶液配成），搅匀，放置24 h，过滤，加入脂质体浓缩液、蒸馏水及其他辅料等，抽滤，滤液补加蒸馏水至规定量，灌封，灭菌。
2.2 总固体物含量测定
分别精密吸取定容后的两组工艺的药液10 ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，烘箱105℃恒温1.5 h，置干燥器中冷却20 min，迅速称重，计算总固体物含量为：工艺（Ⅰ）108.6 mg/ml，工艺（Ⅱ）123.3 mg/ml。两组工艺总固体物含量相差14.7%，说明壳聚糖吸附澄清作用影响了该制剂的有效成分总含量。
2.3 冬虫夏草多糖浓度测定
2.3.1 对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品10.0 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3.2 最大吸收波长的确定根据文献方法[2]，精密吸取葡萄糖对照品溶液和样品溶液各1.0 ml，分别加入蒽酮-硫酸试液2.0 ml，摇匀。置沸水浴中加热5 min，取出放至室温，20 min后以水1.0 ml加2.0 ml显色剂为空白，在550～700 nm波长范围内扫描。结果表明，对照品溶液和样品溶液的最大吸收波长为625 nm。
2.3.3 标准曲线的制备精密吸取葡萄糖对照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加水定容至刻度，分别吸取1.0 ml，置5支具塞试管中，按上述方法操作，在625 nm波长处测定吸收度。以吸收度（A）对浓度（C）进行回归，求得线性回归方程：A=4.02×10-2C-1.65×10-5，r=0.990 2。结果葡萄糖在3.3～9.9 μg/ml范围内有良好的线性关系。
2.3.4 对照品的稳定性试验 照“2.3.3”项下方法，取对照品溶液显色后，在室温下放置，每隔10 min测定吸收度。结果表明，对照品溶液显色后在60 min内吸收度基本保持不变，RSD=2.19%。
2.3.5 多糖的含量测定精密吸取样品1.0 ml，置100 ml量瓶中，加水定容至刻度，作为样品溶液。精密吸取1.0 ml，测定吸收度，计算样品中冬虫夏草多糖的总含量。
2.4正交试验法优选澄清工艺
根据壳聚糖本身的特点及实际应用的情况，确定影响制剂澄清效果的因素，并用L9（34）正交法进行试验，结果见表1（略），表2（略）。
从以上试验优选结果，选择A3B3C2，即加入时药液温度50℃、药液浓度（g∶ml）=1∶4、1%壳聚糖的用量（W/W）3%时，澄清效果最好。
2.5稳定性考察
将两种工艺配制的口服液室温放置12个月，分别在0，3，6，12月四个时段观察澄清度和色泽。原工艺配制的口服液在3～6个月时有絮状物悬浮（摇后即散），澄清工艺配制的口服液絮状物不明显，色泽均棕色。
3 讨论
上述实验结果表明，使用壳聚糖澄清剂用于可博利口服液的澄清效果比传统的水提醇沉工艺好，不仅简化了工艺，总固体物含量也高于原工艺，文献报道[3]壳聚糖除杂较水提醇沉能明显提高多糖和有机酸的含量，因此，使用壳聚糖能使可博利口服液中多糖等有效成分的总保留量得到提高，保证了成品的内在质量。在为期12个月的稳定性考察过程中，两种工艺配制的口服液均相对稳定。
参考文献：
[1]周进东，罗兴洪，刘武.中药口服液的纯化与口感探讨[J].中医药研究，2001，17（3）：42-44.
[2]冯祚臻，官东秀，张晓婷.冬虫夏草多糖脂质体口服液的质量标准[J].沈阳药科大学学报，2005，22（3）：203-205.
[3]张彤，徐莲英，陶建生，等.壳聚糖用于部分单味中药浸提液澄清效果的研究[J].中草药，1999，30（10）：744.