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摘要 蛹虫草含多种生物活性物质，为珍贵而稀有的生物药材。介绍了蛹虫草人工代料栽培技术，包括菌种制备、培养基原料配制、拌料、装瓶、灭菌、接种、菌丝培养、出草管理、采收等内容，旨在为蛹虫草菌种制备和生产提供参考依据。
关键词 蛹虫草；人工代料；栽培技术
中图分类号 S567.35.04 .7 文献标识码 B 文章编号 1007-5739（2016）13-0114-02
蛹虫草（又称北冬虫夏草、北虫草、黄金草），作为一种药用真菌，其药效成分和营养成分与冬虫夏草完全相同，属于世间珍贵而稀有的生物药材[1-2]。蛹虫草含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、超氧化物歧化酶SOD和微量元素硒等多种生物活性物质，具有特殊的药用价值和滋补功效[3-4]。蛹虫草作为冬虫夏草的替代品，目前已广泛用于制药，深受消费者的青睐。人工代料培育蛹虫草不仅占地少，栽培周期短，而且经济效益好，是农村农民、下岗和退休职工兴业致富的好项目，也为我国名贵药材产业化生产又开辟了一个新的途径。
1 菌种制备
优质菌种是种植成功和高效的关键，蛹虫草菌种不可长期保存或多次转管扩繁，否则菌种容易退化变异，产量和品质会明显下降。因此，需要经常留种和更新菌种。
制种方法是采取组织分离法。选择适应性强、发菌快、见光转色快、性状稳定、速生高产的菌株进行组织分离制种，也可直接购买斜面培养基试管母种自行进行扩繁。目前有固体菌种和液体菌种2种类型，其中以液体菌种接种为好[5]。
1.1 液体配制
液体配比为葡萄糖20 g、蛋白胨10 g、磷酸二氢钾3 g、硫酸镁1 g、维生素B1 1片（10 mg）、水1 000 mL（pH值6～7）。先将1 000 mL水加热增温（约40 ℃），倒入蛋白胨搅拌溶解，再倒入其余原料，充分搅拌；然后用pH试纸测试酸碱度（标准pH值是6～7），若偏酸则用氢氧化钠调和，偏碱则用白醋或盐酸调节。
营养液配制的多少应根据生产量灵活掌握。实践证明，使用吸液管喷洒接种，每个培养瓶喷洒菌种4～5 mL，每瓶液体菌种（指小型医用盐水瓶）可接种37～40瓶；也可用蒸馏水或高压灭菌水将液体菌种稀释2～3倍进行接种，可大大提高菌种使用率。
1.2 装瓶
选用500 mL的医用盐水瓶或250 mL小型医用盐水瓶作为液体菌种培养瓶（500 mL大瓶可分装300 mL培养液，250 mL小瓶装至1/2/以上）。装瓶时用玻璃漏斗，以免培养液粘附于瓶口、瓶颈或瓶壁上而招致杂菌感染。瓶口用聚丙烯薄膜或化学棉、脱脂棉棉球封塞严密。
1.3 高压灭菌
用手提式高压灭菌锅灭菌。将上述培养瓶整齐地摆放锅内，上面用干毛巾盖好瓶口，关紧锅盖。大火加热至110 ℃，压力表指针指向0.05时打开排气阀以便排出冷空气，待压力表回至0时关掉排气阀；然后大火加热，让其快速升温至125～126 ℃，压力表指针指向0.15时改用小火，维持1.25 h后停火，等压力表回到0位，冷却后打开锅盖，取瓶出锅。
1.4 放种
培养瓶完全冷却后方可下种，母种扩繁在接种箱进行无菌操作。先将接种用一切用品、工具和试管母种及培养瓶事先放入接种箱内进行消毒。操作人员从接种口把手伸入箱内，在消毒碗内点燃至少2袋起舞消毒剂，进行薰蒸消毒。随即用袖头把接种口堵塞严密，密闭30 min。
操作人员将手洗净，并用75%酒精擦洗1遍，通过袖头伸入接种箱。再用75%酒精把手连同手腕部位一并擦洗1遍，用皮筋把袖头在手腕部扎紧，严防杂菌进入箱内。点着酒精灯，把接种工具用75%酒精擦洗1遍再放在酒精灯上方燎烤消毒；拿起母种试管，用75%酒精擦洗管口周围，并在酒精灯火焰上方燎烤一下。打开母种试管，用接种工具将试管母种切割成0.5 mm×0.5 mm大小菌块，在靠近酒精灯的无菌区进行放种，每瓶放种2～3块。
1.5 液体菌种培养
为利于菌种繁殖和菌丝生长，应将放完种的培养瓶放置黑暗环境中，在摇床上进行振荡培养，可全天24 h不停振荡培养或间歇式每隔1 h左右振摇1次，每次30 min左右。经过8～12 d振荡培养，瓶中便有大量絮状、片状菌丝体和菌丝球充满整个培养瓶；若无摇床条件，可用手摇措施振动瓶液，每隔1～2 h摇动1次为好。注意不可将营养液打湿封膜或棉塞。
2 培养基原料配制
2.1 原料配方
实践表明，人工代料栽培还是选用大米（杂交米）作主料为最好，具有发菌均匀、出草快、产量高的特点。每瓶装大米30 g、黄豆粉（豆面）3 g、营养液50 mL；营养液配方为水1 000 mL（pH值6～7）、葡萄糖25 g、蛋白胨10 g、磷酸二氢钾1.5 g、硫酸镁1 g、柠檬酸铵1 g、维生素B1 2片。
2.2 实例
为提高拌料和装瓶的效率，可一次性拌好能装1 000～2 000瓶的原料，同时应精确地计算出主料和各种辅料的用量。
现以每批装1 000瓶为例，配料如下。主料：大米30 g×1 000=30 kg，黄豆粉3 g×1 000=3 kg；辅料：水50 g×1 000=50 kg，葡萄糖1 250 g，蛋白胨500 g，磷酸二氢钾150 g，硫酸镁50 g，柠檬酸铵50 g，维生素B1 100片。
3 拌料
在地坪上铺1块干净塑料布，将上述2种主料称好倒在塑料布上充分掺拌均匀。再将几种辅料分别精准秤好倒入50 kg的水中，充分搅拌使其溶化。用pH试纸测试酸碱度，以pH值6～7为准。
4 装瓶
可分别自制几个能定量盛装33 g主料（大米30 g，黄豆粉3 g）的容器和定量盛装50 mL液体的容器进行装瓶。装瓶时，应先装主料，再装营养液，装好后用皮筋封好膜后，摇动瓶里原料，使固体与液体充分混合均匀，以利于发菌好、生长整齐。 5 灭菌
可用高压蒸汽炉进行灭菌，即在121 ℃高温和1.5 kg/m2的压力下密闭灭菌30 min，冷却后取出即可；也可常压灭菌，当温度升至100 ℃时，再改小火维持8～10 h即可，闷锅一夜，次日早出锅接种。
6 接种
于接种箱中进行无菌操作，点燃酒精灯，在靠近酒精灯的安全区打开液体菌种瓶，用吸液管吸取液体菌种，每瓶以4～5 mL种量均匀喷注到培养基上，立即封口扎紧（下种量要均匀，喷注菌种尽量匀称）；接好一批培养瓶后及时转入培养室（黑暗环境）进行菌丝培养；接种操作每批之间必须重新消毒，点燃起舞消毒剂2～3袋（第1箱消毒时3袋，之后2袋）。密闭30 min即达消毒效果；将接种好培养瓶整齐摆放在培养架上。
7 菌丝培养
蛹虫草属中低温真菌类，菌丝最适宜生长温度是15～25 ℃，子座最适宜温度为18～22 ℃。要求培养室内具备调节温度、湿度和光照的基本条件；培养室放置培养架，培养架可设6～7层，层高40 cm，保证每个培养瓶都能得到光照。一般25～30 m2的房间可摆放10 000个培养瓶，可生产80 kg左右干品。
7.1 初始阶段（前5 d）
菌丝萌发阶段，要求做到“三控”：一是控光，需要黑暗环境；二是控温，培养室内温度最好控制在15～18 ℃；三是控湿，室内空气相对湿度控制在60%左右。
接种第2天，培养瓶料面上可见到点片或连片发菌；第3天菌丝已大面积展开，占领料面50%以上；第4天菌丝占领料面80%以上；第5天菌丝全部发满料面，并已开始向培养基内渗透一指左右。稀释与未稀释菌种，其菌丝萌发能力完全相同，采取稀释2～3倍方法可解决菌种不足问题。经过5 d时间培养，培养瓶里菌丝很快布满整个料面。
7.2 待菌丝布满料面后（5 d后）
可将温度提高至20～23 ℃，再继续培养15 d左右，菌丝就可吃透整瓶培养基，至此菌丝就完成营养生长阶段，标志菌丝体已发育成熟，开始进入生殖生长时期。
7.3 进入生殖生长阶段后（接种后20 d左右）
进行光照刺激，促进菌丝体转色。打开日光灯，进行全天24 h光照，直到蛹虫草发芽长出小子实体时，再改为白天光照14～15 h，夜晚关灯。白天温度控制在20 ℃，晚上控制在10 ℃左右，通过温差刺激能促进菌丝快速发育；室内湿度60%～65%。见光第1天，料面上菌丝出现微黄；第2天显现正黄色；第3天培养基内菌丝全变鲜黄或米黄色；第4天整瓶呈橘黄色；第5～7天，菌丝基本转完色；第7～10天，料面上出现米粒大小原基。
8 出草管理
经菌丝体生长发育，待培养基料面有突起形成米粒状原基时，蛹虫草即行发芽出草。
8.1 扎孔透气
将牙签或铁丝经75%酒精擦洗消毒后，在封口膜上扎6～8个通气孔，加强气体交换，促使子实体的生长。
8.2 加强室内通风换气
打开换气扇或用电风扇吹风，每天早、中、晚各通风1次，以便补充新鲜空气和排出CO2，防止CO2积累过多，子座不能正常分化，影响生长发育。
8.3 温湿度管理
到了出草阶段，温度和湿度对子实体的生长十分重要。温度控制在18～21 ℃。尽量使空气相对湿度提高到80%～85%。室内湿度过小时，瓶内培养基容易提早失水而影响产量；若室内湿度过大时，容易诱发气生菌丝，对子实体生长同样不利。可采取在地面上洒水或泼水，空间用空气加湿器增加室内湿度；无条件用空气加湿器者，可用喷雾器在空间喷雾增湿。
8.4 光照管理
生长一段时间，部分瓶里的子实体有一边倒现象，这是由于蛹虫草较强的趋光性所致。因此，应注意在子实体形成后可根据生长情况调整培养瓶与光源相对方向，让其受光均匀，以提高产品的品质和产量。
9 采收
经过45～50 d的精心培育，子实体长至7～8 cm，子实体呈橘红色或橘黄色棒状，顶端出现许多小刺时，表明子实体已经成熟，这时就可采收；打开培养瓶封口膜，用消毒的摄子小心夹出子实体，注意不要碰伤子实体表皮，也不要用力太大，以免拉断，影响商品价值；将采收的子实体放在干净的器具内，低温烘干或在空调或电风扇下吹干，不可在太阳下晒干，以免褪色影响商品价值。晾干标准：用手一捏即碎，然后再放空气中让其回潮，再用手一捏又不碎即可，干燥好的子实体装袋密封待售。
10 参考文献
[1] 张显科，刘文霞.不同培养料栽培蛹虫草试验研究[J].中国食用菌，1997（2）：21-22.
[2] 李美娜，吴谢军，李春燕，等.人工栽培蛹虫草退化现象的分子分析[J].菌物系统，2003（2）：277-282.
[3] 彭国平，袁永泰.冬虫夏草与人工蛹虫草的成分比较[J].南京中医药大学学报，1996（5）：26-27.
[4] 林群英，宋斌，李泰辉.蛹虫草研究进展[J].微生物学通报，2006（4）：154-157.
[5] 代君君，范涛，吴传华.人工栽培蛹虫草研究的概述[J].安徽农业科学，2007（18）：5469-5471.
关键词 蛹虫草；人工代料；栽培技术
中图分类号 S567.35.04 .7 文献标识码 B 文章编号 1007-5739（2016）13-0114-02
蛹虫草（又称北冬虫夏草、北虫草、黄金草），作为一种药用真菌，其药效成分和营养成分与冬虫夏草完全相同，属于世间珍贵而稀有的生物药材[1-2]。蛹虫草含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、超氧化物歧化酶SOD和微量元素硒等多种生物活性物质，具有特殊的药用价值和滋补功效[3-4]。蛹虫草作为冬虫夏草的替代品，目前已广泛用于制药，深受消费者的青睐。人工代料培育蛹虫草不仅占地少，栽培周期短，而且经济效益好，是农村农民、下岗和退休职工兴业致富的好项目，也为我国名贵药材产业化生产又开辟了一个新的途径。
1 菌种制备
优质菌种是种植成功和高效的关键，蛹虫草菌种不可长期保存或多次转管扩繁，否则菌种容易退化变异，产量和品质会明显下降。因此，需要经常留种和更新菌种。
制种方法是采取组织分离法。选择适应性强、发菌快、见光转色快、性状稳定、速生高产的菌株进行组织分离制种，也可直接购买斜面培养基试管母种自行进行扩繁。目前有固体菌种和液体菌种2种类型，其中以液体菌种接种为好[5]。
1.1 液体配制
液体配比为葡萄糖20 g、蛋白胨10 g、磷酸二氢钾3 g、硫酸镁1 g、维生素B1 1片（10 mg）、水1 000 mL（pH值6～7）。先将1 000 mL水加热增温（约40 ℃），倒入蛋白胨搅拌溶解，再倒入其余原料，充分搅拌；然后用pH试纸测试酸碱度（标准pH值是6～7），若偏酸则用氢氧化钠调和，偏碱则用白醋或盐酸调节。
营养液配制的多少应根据生产量灵活掌握。实践证明，使用吸液管喷洒接种，每个培养瓶喷洒菌种4～5 mL，每瓶液体菌种（指小型医用盐水瓶）可接种37～40瓶；也可用蒸馏水或高压灭菌水将液体菌种稀释2～3倍进行接种，可大大提高菌种使用率。
1.2 装瓶
选用500 mL的医用盐水瓶或250 mL小型医用盐水瓶作为液体菌种培养瓶（500 mL大瓶可分装300 mL培养液，250 mL小瓶装至1/2/以上）。装瓶时用玻璃漏斗，以免培养液粘附于瓶口、瓶颈或瓶壁上而招致杂菌感染。瓶口用聚丙烯薄膜或化学棉、脱脂棉棉球封塞严密。
1.3 高压灭菌
用手提式高压灭菌锅灭菌。将上述培养瓶整齐地摆放锅内，上面用干毛巾盖好瓶口，关紧锅盖。大火加热至110 ℃，压力表指针指向0.05时打开排气阀以便排出冷空气，待压力表回至0时关掉排气阀；然后大火加热，让其快速升温至125～126 ℃，压力表指针指向0.15时改用小火，维持1.25 h后停火，等压力表回到0位，冷却后打开锅盖，取瓶出锅。
1.4 放种
培养瓶完全冷却后方可下种，母种扩繁在接种箱进行无菌操作。先将接种用一切用品、工具和试管母种及培养瓶事先放入接种箱内进行消毒。操作人员从接种口把手伸入箱内，在消毒碗内点燃至少2袋起舞消毒剂，进行薰蒸消毒。随即用袖头把接种口堵塞严密，密闭30 min。
操作人员将手洗净，并用75%酒精擦洗1遍，通过袖头伸入接种箱。再用75%酒精把手连同手腕部位一并擦洗1遍，用皮筋把袖头在手腕部扎紧，严防杂菌进入箱内。点着酒精灯，把接种工具用75%酒精擦洗1遍再放在酒精灯上方燎烤消毒；拿起母种试管，用75%酒精擦洗管口周围，并在酒精灯火焰上方燎烤一下。打开母种试管，用接种工具将试管母种切割成0.5 mm×0.5 mm大小菌块，在靠近酒精灯的无菌区进行放种，每瓶放种2～3块。
1.5 液体菌种培养
为利于菌种繁殖和菌丝生长，应将放完种的培养瓶放置黑暗环境中，在摇床上进行振荡培养，可全天24 h不停振荡培养或间歇式每隔1 h左右振摇1次，每次30 min左右。经过8～12 d振荡培养，瓶中便有大量絮状、片状菌丝体和菌丝球充满整个培养瓶；若无摇床条件，可用手摇措施振动瓶液，每隔1～2 h摇动1次为好。注意不可将营养液打湿封膜或棉塞。
2 培养基原料配制
2.1 原料配方
实践表明，人工代料栽培还是选用大米（杂交米）作主料为最好，具有发菌均匀、出草快、产量高的特点。每瓶装大米30 g、黄豆粉（豆面）3 g、营养液50 mL；营养液配方为水1 000 mL（pH值6～7）、葡萄糖25 g、蛋白胨10 g、磷酸二氢钾1.5 g、硫酸镁1 g、柠檬酸铵1 g、维生素B1 2片。
2.2 实例
为提高拌料和装瓶的效率，可一次性拌好能装1 000～2 000瓶的原料，同时应精确地计算出主料和各种辅料的用量。
现以每批装1 000瓶为例，配料如下。主料：大米30 g×1 000=30 kg，黄豆粉3 g×1 000=3 kg；辅料：水50 g×1 000=50 kg，葡萄糖1 250 g，蛋白胨500 g，磷酸二氢钾150 g，硫酸镁50 g，柠檬酸铵50 g，维生素B1 100片。
3 拌料
在地坪上铺1块干净塑料布，将上述2种主料称好倒在塑料布上充分掺拌均匀。再将几种辅料分别精准秤好倒入50 kg的水中，充分搅拌使其溶化。用pH试纸测试酸碱度，以pH值6～7为准。
4 装瓶
可分别自制几个能定量盛装33 g主料（大米30 g，黄豆粉3 g）的容器和定量盛装50 mL液体的容器进行装瓶。装瓶时，应先装主料，再装营养液，装好后用皮筋封好膜后，摇动瓶里原料，使固体与液体充分混合均匀，以利于发菌好、生长整齐。 5 灭菌
可用高压蒸汽炉进行灭菌，即在121 ℃高温和1.5 kg/m2的压力下密闭灭菌30 min，冷却后取出即可；也可常压灭菌，当温度升至100 ℃时，再改小火维持8～10 h即可，闷锅一夜，次日早出锅接种。
6 接种
于接种箱中进行无菌操作，点燃酒精灯，在靠近酒精灯的安全区打开液体菌种瓶，用吸液管吸取液体菌种，每瓶以4～5 mL种量均匀喷注到培养基上，立即封口扎紧（下种量要均匀，喷注菌种尽量匀称）；接好一批培养瓶后及时转入培养室（黑暗环境）进行菌丝培养；接种操作每批之间必须重新消毒，点燃起舞消毒剂2～3袋（第1箱消毒时3袋，之后2袋）。密闭30 min即达消毒效果；将接种好培养瓶整齐摆放在培养架上。
7 菌丝培养
蛹虫草属中低温真菌类，菌丝最适宜生长温度是15～25 ℃，子座最适宜温度为18～22 ℃。要求培养室内具备调节温度、湿度和光照的基本条件；培养室放置培养架，培养架可设6～7层，层高40 cm，保证每个培养瓶都能得到光照。一般25～30 m2的房间可摆放10 000个培养瓶，可生产80 kg左右干品。
7.1 初始阶段（前5 d）
菌丝萌发阶段，要求做到“三控”：一是控光，需要黑暗环境；二是控温，培养室内温度最好控制在15～18 ℃；三是控湿，室内空气相对湿度控制在60%左右。
接种第2天，培养瓶料面上可见到点片或连片发菌；第3天菌丝已大面积展开，占领料面50%以上；第4天菌丝占领料面80%以上；第5天菌丝全部发满料面，并已开始向培养基内渗透一指左右。稀释与未稀释菌种，其菌丝萌发能力完全相同，采取稀释2～3倍方法可解决菌种不足问题。经过5 d时间培养，培养瓶里菌丝很快布满整个料面。
7.2 待菌丝布满料面后（5 d后）
可将温度提高至20～23 ℃，再继续培养15 d左右，菌丝就可吃透整瓶培养基，至此菌丝就完成营养生长阶段，标志菌丝体已发育成熟，开始进入生殖生长时期。
7.3 进入生殖生长阶段后（接种后20 d左右）
进行光照刺激，促进菌丝体转色。打开日光灯，进行全天24 h光照，直到蛹虫草发芽长出小子实体时，再改为白天光照14～15 h，夜晚关灯。白天温度控制在20 ℃，晚上控制在10 ℃左右，通过温差刺激能促进菌丝快速发育；室内湿度60%～65%。见光第1天，料面上菌丝出现微黄；第2天显现正黄色；第3天培养基内菌丝全变鲜黄或米黄色；第4天整瓶呈橘黄色；第5～7天，菌丝基本转完色；第7～10天，料面上出现米粒大小原基。
8 出草管理
经菌丝体生长发育，待培养基料面有突起形成米粒状原基时，蛹虫草即行发芽出草。
8.1 扎孔透气
将牙签或铁丝经75%酒精擦洗消毒后，在封口膜上扎6～8个通气孔，加强气体交换，促使子实体的生长。
8.2 加强室内通风换气
打开换气扇或用电风扇吹风，每天早、中、晚各通风1次，以便补充新鲜空气和排出CO2，防止CO2积累过多，子座不能正常分化，影响生长发育。
8.3 温湿度管理
到了出草阶段，温度和湿度对子实体的生长十分重要。温度控制在18～21 ℃。尽量使空气相对湿度提高到80%～85%。室内湿度过小时，瓶内培养基容易提早失水而影响产量；若室内湿度过大时，容易诱发气生菌丝，对子实体生长同样不利。可采取在地面上洒水或泼水，空间用空气加湿器增加室内湿度；无条件用空气加湿器者，可用喷雾器在空间喷雾增湿。
8.4 光照管理
生长一段时间，部分瓶里的子实体有一边倒现象，这是由于蛹虫草较强的趋光性所致。因此，应注意在子实体形成后可根据生长情况调整培养瓶与光源相对方向，让其受光均匀，以提高产品的品质和产量。
9 采收
经过45～50 d的精心培育，子实体长至7～8 cm，子实体呈橘红色或橘黄色棒状，顶端出现许多小刺时，表明子实体已经成熟，这时就可采收；打开培养瓶封口膜，用消毒的摄子小心夹出子实体，注意不要碰伤子实体表皮，也不要用力太大，以免拉断，影响商品价值；将采收的子实体放在干净的器具内，低温烘干或在空调或电风扇下吹干，不可在太阳下晒干，以免褪色影响商品价值。晾干标准：用手一捏即碎，然后再放空气中让其回潮，再用手一捏又不碎即可，干燥好的子实体装袋密封待售。
10 参考文献
[1] 张显科，刘文霞.不同培养料栽培蛹虫草试验研究[J].中国食用菌，1997（2）：21-22.
[2] 李美娜，吴谢军，李春燕，等.人工栽培蛹虫草退化现象的分子分析[J].菌物系统，2003（2）：277-282.
[3] 彭国平，袁永泰.冬虫夏草与人工蛹虫草的成分比较[J].南京中医药大学学报，1996（5）：26-27.
[4] 林群英，宋斌，李泰辉.蛹虫草研究进展[J].微生物学通报，2006（4）：154-157.
[5] 代君君，范涛，吴传华.人工栽培蛹虫草研究的概述[J].安徽农业科学，2007（18）：5469-5471.