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摘要：目的：分析小儿咽扁颗粒中绿原酸含量应用高效液相色谱法进行定量的方法。方法：应用高效液相色谱法进行测定，取十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，取乙晴-0.4%磷酸溶液作为流动相，检测时波长取327nm，检测流速控制在每分钟1.0ml。结果：小儿咽扁颗粒中绿原酸含量测定范围在0.2到2.0g之间，其与峰值面积积分值间呈现良好的线性关系，加样后评价回收率为99.68%，RSD为0.83%。结论：对小儿咽扁颗粒中的绿原酸实施高效液相色谱法进行测定，简单易行，精确度较高，这对于小儿咽扁颗粒的质量控制具有重要意义。
关键词：高效液相色谱法；小儿咽扁颗粒；绿原酸
小儿咽扁颗粒是一种中成药剂，其主要组成包括了金银花、玄参、射干、桔梗等8种中药组成，具有清热利咽、解毒止痛的效果，该种药物目前被广泛应用于肺实热引起的咽喉肿痛、咳嗽痰盛、咽炎喉炎以及扁桃体炎等症状。药物组成中的金银花，其所含的绿原酸是药物的重要有效成分，但不同的中药制剂，其成分差异较大，为有效控制药物本身的质量，笔者根据《药品注册管理办法》及相关技术指导原则[1]，对小儿咽扁颗粒中绿原酸的含量进行了高效液相色谱法的测定，现报道如下。
1仪器与材料
1.1仪器选择：选取由日本岛津公司生产的LC-10AATVP型高效液相色谱仪、SPD-10AVP型紫外检测器，以及梅特勒AB204型电子天平。
1.2材料选择：选取由中国药品生物制品检定所生产的批号为110753-200413的绿原酸做对照品，并选取市场销售的小儿咽扁颗粒，药物生产批号分别为20101021、20101022、20101023。此外，还需选取乙晴、磷酸、甲醇做色谱纯，水选择双重蒸馏水。
2方法结果
2.1色谱条件：色谱柱为ODS色谱柱，条件为150mm×4.6mm，5μm；流动相，乙晴-0.4%磷酸溶液，比例为13：87；流速控制在每分钟1.0ml；检测波长定为327nm；进样量设定为10μL；绿原酸峰理论板数应不低于1000。
2.2溶液的制备：适量称取绿原酸对照品置入棕色量杯中，并加入50%甲醇进行溶解稀释，至溶液浓度为40μg/ml后贮存对照。电子天平精密称取小儿咽扁颗粒2g，置入锥形瓶中，加入25ml50%甲醇进行稀释后称取定质量，以160W功率、59kHz频率进行半小时超声处理，之后放冷后称定质量，并补足50%甲醇的缺失量，摇匀溶液后进行过滤，精密称取5ml滤液置入棕色量杯中，并加入50%甲醇至25ml，在此摇匀过滤后取滤液即可得到供试品溶液。此外，按照处方称取不含金银花的其他药材，并按照与小儿咽扁颗粒同样的制备工艺制备不含绿原酸的阴性对照溶液，并在上述同等色谱条件下对制备的阴性溶液进行测定。
2.3适用性研究：抽取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，按照2.1中相同的色谱条件进行分析，记录并分析色谱图，结果显示，同等的色谱条件下，绿原酸吸收峰处阴性对照无干扰。
2.4线性关系研究：精密抽取绿原酸对照品溶液，并分别制备浓度为0.2g/L、0.16g/L、0.12g/L、0.08g/L、0.04g/L、0.02g/L的溶液，并分别抽取制备后溶液10μL，应用拟定的色谱条件进行测定，以绿原酸的峰面积积分数值作纵坐标，以进行量作横坐标进行线性回归，得到回顾方程：Y=1.62×107X+2208.2679（r=0.999，n=6），计算结果显示，绿原酸进样量在0.2至2μg之间内时，其与峰面积积分值有良好的线性关系。
2.5精密度研究：吸取10μL对照品溶液，按照2.1中拟定的色谱条件进行重复5次的测定，并记录峰面积分值，其检测结果显示，峰面积的RSD为0.81%，此结果说明仪器精密度良好。
2.6稳定性及重复性研究：取同一供试品溶液，分别在1小时、3小时、5小时及8小时进样，并记录峰面积，结果显示RSD为0.91%，此结果说明供试品溶液在8个小时之内的稳定性较高。另外，取同批样品5份，依据2.2方法制备供试品溶液，并依据2.1中色谱条件进行测定，记录峰面积，结果显示RSD为1.52%，此结果表面高效液相色谱法具有较好的重复性。
2.7回收率研究：先利用电子天平精密称取含量已知的供試品溶液，之后精密量取定量的绿原酸对照品溶液，将混合溶液摇匀后按照2.1色谱条件进行测定，以计算加样回收率，结果详见表1。
2.8样品含量测定：取4批不同批次的样品，依照2.2中方法制备供试品溶液，并按照2.1色谱条件进行峰面积测定，以测定样品中绿原酸含量，结果显示，四批样品含量分别为5.98mg、5.94mg、6.02mg、5.88mg。
3讨论
小儿咽扁颗粒是一种由金银花、桔梗、金果榄等八种中药组成的中药制剂，该种药物功能主治因肺实热引起的咽喉肿痛、咽喉炎症、扁桃体炎症等症状[2]。药物组成中的金银花中含有大量的绿原酸，绿原酸是小儿咽扁颗粒的主要有效成分。对于药物质量的检测，以往临床缺乏含量检测内容，为了有效控制药物的质量，对小儿咽扁颗粒中有效成分绿原酸的含量进行测定是非常必要的。既往临床对于高效液相色谱法测定绿原酸含量的报道不少[3]，但中药制剂的成分差异较大，含量测定的条件变化较大，为深入研究高效液相色谱法在小儿咽扁颗粒绿原酸含量检测中的价值，笔者此次对绿原酸标准含量测定项进行了研究，并建立了测定绿原酸含量的高效液相色谱法。
现笔者也就高效液相色谱法检测的注意事项进行如下总结：○1波长的选择，绿原酸对照溶液在327nm波长处有最大吸收，因此选取该波长作为检测波长的检测数值最为合理、有效。○2流动相的选择，结合本实验特效、国内学者相关研究，笔者认为乙晴-0.4%磷酸溶液，比例为13：87作为流动相，其保留的时间会缩短、峰形和分离的效果更佳[5]。○3在选择溶媒是，30%到50%的甲醇是最佳选择，但由于低浓度甲醇提取时杂志含量较高，因此选取50%甲醇作为溶媒是最为合理的。
试验证明，高效液相色谱法测定小儿咽扁颗粒中绿原酸含量，操作简单方便，重现性好，精确度高，这对于控制小儿咽扁颗粒的质量具有重要意义。
参考文献：
[1]国家食品药品监督管理局.药物研究技术指导原则（2005）[M].北京：中国医药科技出版社，2005：196.
[2]WS3-B-1491-93，卫生部药品标准.中药成分制剂[S].
[3]刘小松，李丽华，姜平川，等.HPLC法测定病毒清液中经绿原酸含量[J].中草药，2002，33（10）：907-908.
[4]周海燕，李丹.高效液相色谱法测定清开灵注射液中绿原酸含量[J].中国药业，2011，20（1）：36-37.
[5]国家药典委员会编.中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2005，1552.
关键词：高效液相色谱法；小儿咽扁颗粒；绿原酸
小儿咽扁颗粒是一种中成药剂，其主要组成包括了金银花、玄参、射干、桔梗等8种中药组成，具有清热利咽、解毒止痛的效果，该种药物目前被广泛应用于肺实热引起的咽喉肿痛、咳嗽痰盛、咽炎喉炎以及扁桃体炎等症状。药物组成中的金银花，其所含的绿原酸是药物的重要有效成分，但不同的中药制剂，其成分差异较大，为有效控制药物本身的质量，笔者根据《药品注册管理办法》及相关技术指导原则[1]，对小儿咽扁颗粒中绿原酸的含量进行了高效液相色谱法的测定，现报道如下。
1仪器与材料
1.1仪器选择：选取由日本岛津公司生产的LC-10AATVP型高效液相色谱仪、SPD-10AVP型紫外检测器，以及梅特勒AB204型电子天平。
1.2材料选择：选取由中国药品生物制品检定所生产的批号为110753-200413的绿原酸做对照品，并选取市场销售的小儿咽扁颗粒，药物生产批号分别为20101021、20101022、20101023。此外，还需选取乙晴、磷酸、甲醇做色谱纯，水选择双重蒸馏水。
2方法结果
2.1色谱条件：色谱柱为ODS色谱柱，条件为150mm×4.6mm，5μm；流动相，乙晴-0.4%磷酸溶液，比例为13：87；流速控制在每分钟1.0ml；检测波长定为327nm；进样量设定为10μL；绿原酸峰理论板数应不低于1000。
2.2溶液的制备：适量称取绿原酸对照品置入棕色量杯中，并加入50%甲醇进行溶解稀释，至溶液浓度为40μg/ml后贮存对照。电子天平精密称取小儿咽扁颗粒2g，置入锥形瓶中，加入25ml50%甲醇进行稀释后称取定质量，以160W功率、59kHz频率进行半小时超声处理，之后放冷后称定质量，并补足50%甲醇的缺失量，摇匀溶液后进行过滤，精密称取5ml滤液置入棕色量杯中，并加入50%甲醇至25ml，在此摇匀过滤后取滤液即可得到供试品溶液。此外，按照处方称取不含金银花的其他药材，并按照与小儿咽扁颗粒同样的制备工艺制备不含绿原酸的阴性对照溶液，并在上述同等色谱条件下对制备的阴性溶液进行测定。
2.3适用性研究：抽取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，按照2.1中相同的色谱条件进行分析，记录并分析色谱图，结果显示，同等的色谱条件下，绿原酸吸收峰处阴性对照无干扰。
2.4线性关系研究：精密抽取绿原酸对照品溶液，并分别制备浓度为0.2g/L、0.16g/L、0.12g/L、0.08g/L、0.04g/L、0.02g/L的溶液，并分别抽取制备后溶液10μL，应用拟定的色谱条件进行测定，以绿原酸的峰面积积分数值作纵坐标，以进行量作横坐标进行线性回归，得到回顾方程：Y=1.62×107X+2208.2679（r=0.999，n=6），计算结果显示，绿原酸进样量在0.2至2μg之间内时，其与峰面积积分值有良好的线性关系。
2.5精密度研究：吸取10μL对照品溶液，按照2.1中拟定的色谱条件进行重复5次的测定，并记录峰面积分值，其检测结果显示，峰面积的RSD为0.81%，此结果说明仪器精密度良好。
2.6稳定性及重复性研究：取同一供试品溶液，分别在1小时、3小时、5小时及8小时进样，并记录峰面积，结果显示RSD为0.91%，此结果说明供试品溶液在8个小时之内的稳定性较高。另外，取同批样品5份，依据2.2方法制备供试品溶液，并依据2.1中色谱条件进行测定，记录峰面积，结果显示RSD为1.52%，此结果表面高效液相色谱法具有较好的重复性。
2.7回收率研究：先利用电子天平精密称取含量已知的供試品溶液，之后精密量取定量的绿原酸对照品溶液，将混合溶液摇匀后按照2.1色谱条件进行测定，以计算加样回收率，结果详见表1。
2.8样品含量测定：取4批不同批次的样品，依照2.2中方法制备供试品溶液，并按照2.1色谱条件进行峰面积测定，以测定样品中绿原酸含量，结果显示，四批样品含量分别为5.98mg、5.94mg、6.02mg、5.88mg。
3讨论
小儿咽扁颗粒是一种由金银花、桔梗、金果榄等八种中药组成的中药制剂，该种药物功能主治因肺实热引起的咽喉肿痛、咽喉炎症、扁桃体炎症等症状[2]。药物组成中的金银花中含有大量的绿原酸，绿原酸是小儿咽扁颗粒的主要有效成分。对于药物质量的检测，以往临床缺乏含量检测内容，为了有效控制药物的质量，对小儿咽扁颗粒中有效成分绿原酸的含量进行测定是非常必要的。既往临床对于高效液相色谱法测定绿原酸含量的报道不少[3]，但中药制剂的成分差异较大，含量测定的条件变化较大，为深入研究高效液相色谱法在小儿咽扁颗粒绿原酸含量检测中的价值，笔者此次对绿原酸标准含量测定项进行了研究，并建立了测定绿原酸含量的高效液相色谱法。
现笔者也就高效液相色谱法检测的注意事项进行如下总结：○1波长的选择，绿原酸对照溶液在327nm波长处有最大吸收，因此选取该波长作为检测波长的检测数值最为合理、有效。○2流动相的选择，结合本实验特效、国内学者相关研究，笔者认为乙晴-0.4%磷酸溶液，比例为13：87作为流动相，其保留的时间会缩短、峰形和分离的效果更佳[5]。○3在选择溶媒是，30%到50%的甲醇是最佳选择，但由于低浓度甲醇提取时杂志含量较高，因此选取50%甲醇作为溶媒是最为合理的。
试验证明，高效液相色谱法测定小儿咽扁颗粒中绿原酸含量，操作简单方便，重现性好，精确度高，这对于控制小儿咽扁颗粒的质量具有重要意义。
参考文献：
[1]国家食品药品监督管理局.药物研究技术指导原则（2005）[M].北京：中国医药科技出版社，2005：196.
[2]WS3-B-1491-93，卫生部药品标准.中药成分制剂[S].
[3]刘小松，李丽华，姜平川，等.HPLC法测定病毒清液中经绿原酸含量[J].中草药，2002，33（10）：907-908.
[4]周海燕，李丹.高效液相色谱法测定清开灵注射液中绿原酸含量[J].中国药业，2011，20（1）：36-37.
[5]国家药典委员会编.中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2005，1552.