【摘 要】
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目的 构建HBV临床分离株复制细胞系,为抗病毒药物筛选提供新的细胞模型.方法 从乙型肝炎患者血清中PCR扩增乙肝病毒全长基因组,经SapI酶切,T4连接酶连接环化后作为模板,PCR扩增0.2拷贝HBV基因组(nt1402-nt1989)及1.0拷贝HBV基因组(nt1402-nt3215-nt1407);依次克隆入pcDNA3(-)-EGFP-ΔCMV载体得到p1.2×HBV-EGFP质粒;用Lipofectamine 2000将重组质粒转染HepG2细胞,使用含G418(700μg/mL)培养基培养2～
【机 构】
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442000 湖北 十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院);华中科技大学同济医学院附属同济医院实验医学研究中心;武汉大学基础医学院
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目的 构建HBV临床分离株复制细胞系,为抗病毒药物筛选提供新的细胞模型.方法 从乙型肝炎患者血清中PCR扩增乙肝病毒全长基因组,经SapI酶切,T4连接酶连接环化后作为模板,PCR扩增0.2拷贝HBV基因组(nt1402-nt1989)及1.0拷贝HBV基因组(nt1402-nt3215-nt1407);依次克隆入pcDNA3(-)-EGFP-ΔCMV载体得到p1.2×HBV-EGFP质粒;用Lipofectamine 2000将重组质粒转染HepG2细胞,使用含G418(700μg/mL)培养基培养2～3周,挑选阳性克隆,进一步传代培养获得HBV复制细胞系(HepG2X15).收集细胞系培养上清ELISA检测HBsAg和HBeAg水平;Real-time PCR检测HBV病毒含量.收集培养细胞,Southern blot检测细胞内HBV复制中间体;免疫荧光检测细胞内HBsAg和HBcAg.结果 筛选出1株来源于临床分离株的HBV-C基因型复制细胞系,在培养上清中检测到高水平HBsAg、HBeAg及HBV DNA,细胞内检测到HBV复制中间体,免疫荧光检测到细胞内高水平HBsAg和HBcAg.与HepG2.2.15细胞系相比,上清中HBsAg和HBV DNA水平更高.结论 成功建立来源于临床分离株的HBV-C基因型复制细胞系,该细胞系稳定表达HBsAg、HBeAg和HBcAg,并支持高水平的HBV复制,可以用于抗HBV药物筛选及临床分离株的耐药机制等研究.
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目的 分析超声内镜下内镜黏膜剥离术(ESD)治疗乙肝肝硬化患者食管良性肿瘤的可行性.方法 回顾2010年1月至2020年6月医院病历管理系统,纳入经ESD治疗的食管良性肿瘤患者174例,男性92例,女性82例,年龄(53.2±10.5)岁;其中伴有乙肝肝硬化患者34例(肝硬化组),不伴有乙肝肝硬化患者140例(非肝硬化组).计量资料采用t检验或Kruskal-Wallis H检验,计数资料采用卡方检验.结果 肝硬化组、非肝硬化组Child-Pugh评分分别为7(5,12)分、0(0,0)分,比较差异具有统
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