【摘 要】
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目的探讨抑制细胞红蛋白(CYGB)表达对脑胶质瘤细胞增殖的影响及其作用机制。方法从汕头大学医学院第二附属医院神经外科自2012年6月至2015年12月行脑胶质瘤切除手术的患者中获取新鲜胶质瘤标本,提取、培养出原代脑胶质瘤细胞并进行纯度鉴定。将实验细胞分为4组:转染24 h组、转染48 h组、转染72 h组及阴性对照组,前3组应用基因转染技术将shRNA-CYGB质粒转染至脑胶质瘤细胞24 h、48
【机 构】
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目的探讨抑制细胞红蛋白(CYGB)表达对脑胶质瘤细胞增殖的影响及其作用机制。
方法从汕头大学医学院第二附属医院神经外科自2012年6月至2015年12月行脑胶质瘤切除手术的患者中获取新鲜胶质瘤标本,提取、培养出原代脑胶质瘤细胞并进行纯度鉴定。将实验细胞分为4组:转染24 h组、转染48 h组、转染72 h组及阴性对照组,前3组应用基因转染技术将shRNA-CYGB质粒转染至脑胶质瘤细胞24 h、48 h、72 h以抑制CYGB表达。采用CCK-8法观察各组脑胶质瘤细胞在培养第0、1、2、3、4、5天的增殖情况,采用Western blotting检测各组脑胶质瘤细胞CYGB、磷脂酰3羟激酶(PI3K)、总丙氨酸氨基转移酶(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达,采用ELISA法检测各组脑胶质瘤细胞白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。
结果(1)随检测时间点推移,各组脑胶质瘤细胞的增殖能力均逐渐增强,各时间点间细胞吸光度值差异均有统计学意义(P<0.05)。在不同检测时间点,与阴性对照组比较,转染24 h、48 h、72 h组细胞的增殖能力明显增强,细胞吸光度值差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与阴性对照组比较,转染24 h、48 h、72 h组CYGB蛋白表达依次降低,PI3K、p-Akt蛋白表达依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05);各组脑胶质瘤细胞总Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。(3)与阴性对照组比较,转染24 h、48 h、72 h组IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β和VEGF含量依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)Spearman相关性分析显示:脑胶质瘤细胞CYGB蛋白表达与PI3K、p-Akt蛋白表达及IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、VEGF含量呈负相关关系(P<0.05)。
结论CYGB可能是通过PI3K-Akt信号通路影响脑胶质瘤细胞的增殖。
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