论文部分内容阅读
摘要
[目的]研究地榆、苍术、紫花地丁、半枝莲、大黄、枸骨、千里光等7种中草药的抑菌、杀菌活性。[方法]选用上述7种中草药用95%的酒精提取其活性成分，对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌等4种菌进行抑菌、杀菌试验测定。[结果]7种中草药具有广谱的抗菌作用， 大黄对4种菌的抑菌率均在82.3%以上、杀菌率在82.0%以上，是7种中草药中抗菌效果最好的。[结论]7种中草药对4种菌均有明显的抑制和杀菌作用。
关键词中草药提取物；植物活性物质；抑菌作用；杀菌作用
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）28-09722-03
Study on Action of Bacteriostasis and Disinfection of Alcohol Extracts from 7 Kinds of Chinese Medicinal Herbs
YIN Lu， HU Renhuo*， QIU Riguang et al
（School of Nuclear Technology and Chemistry & Life Science， Hubei University of Science and Technology， Xianning， Hubei 437100）
Abstract[Objective] To study the antibacterial and sterilization activity of seven kinds of Chinese herbal medicine which are Radix sanguisorbae， Atractylodes rhizome， Violae herba， Portulaca grandiflora hook， Rheum palmatum， Ilex cornuta and Senecio scandens etc. [Method] The active ingredients of the above 7 kinds of Chinese herbal medicine are extracted with 95% alcohol， and then to study the antibacterial and sterilization effect on the four kinds of bacteria： Escherichia coli， Bacillus subtilis， Staphylococcus aureus and Saccharomyces cerevisiae. [Result] 7 kinds of Chinese herbal medicine has a broad spectrum of antibacterial activity， Rheum palmatum which antibacterial rate against four bacteria is above 82.3% and sterilization rate more than 82.0% has the best antimicrobial effect among the 7 kinds of Chinese herbal medicines. [Conclusion] 7 kinds of Chinese herbal medicine has obvious bactericidal effect on 4 kinds of bacteria.
Key wordsHerbal extraction； Plant active ingredient； Antibacterial effect； Sterilization effect
我國的中草药资源非常丰富，我国劳动人民应用中药已有数千年的历史，许多中草药具有抗菌消炎的作用。该课题组在前期研究的基础上，筛选出地榆、苍术、紫花地丁、半枝莲、大黄、枸骨、千里光等7种常见中草药，用95%酒精提取其活性成分，选取大肠杆菌、枯草杆菌菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等常见污染菌作为靶标菌，通过抑菌、杀菌试验，检测中草药对靶标菌的作用效果，为开发绿色杀菌剂提供参考。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1
供试中草药。 地榆（Radix sanguisorbae）、苍术（Atractylodes rhizome）、紫花地丁（Violae herba）半枝莲（Portulaca grandiflora hook）、大黄（Rheum palmatum）、枸骨（Ilex cornuta）、千里光（Senecio scandens），以上7种中草药均购买于咸宁市温泉中药店，烘干备用。
1.1.2
供试菌种。枯草杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌 （Staphyloccocus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、酵母菌（Saccharomyces cerevisiae），上述菌种均由华中农业大学发酵工程室提供。
1.2试验仪器和试剂
1.2.1
试验仪器。DH5000AB型电热恒温培养箱、SW—CJ—1D型单人超净工作台、YX280A手提式不锈钢消毒器、J—2菌落计数器、DH-101电热恒温鼓风干燥箱、84—Ⅱ型加热磁力搅拌器、BCD—216荣事达冰箱。
1.2.2
试验试剂。1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L HCl溶液、75%酒精、95%酒精、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基。 1.3试验方法
1.3.1
菌悬液的配制。将大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌接种在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，37 ℃培养24 h；酵母菌接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，28 ℃培养48 h。
将培养好的菌种，分别用接种环挑取少许菌体于装有无菌水的试管内，震荡均匀，制成菌悬液。用平板菌落计数法测定其菌液浓度，并用稀释法，使菌液含量数为104 cfu/ml，即为供试菌液。
1.3.2
中草药提取液的配制。
将中草药烘干、粉碎，分别用95%酒精[1]常温下萃取4 d[2]，将提取液离心后，减压蒸馏温度约为50～52 ℃，将中草药提取液中的酒精蒸发。然后用蒸馏水定容到质量浓度为1 g/ml，置于0～4 ℃冰箱中备用。
1.3.3
体外抑菌试验测定[3]。将固体培养基加热熔化，每20 ml固体培养基加入已装有预定量中草药提取液（0.5、2.0 ml）的无菌培养皿（直径为15 mm）中，再加入0.2 ml菌液（稀释后菌液浓度约为103个/ml），用涂布器涂布均匀，每一处理重复3次，用无菌水作对照。上述操作均在超净工作台内进行。将细菌培养皿倒置，置36～37 ℃恒温培养24 h，将酵母菌培养皿置恒温箱中28 ℃恒温培养48 h后统计菌落个数，计算抑菌率[4]。抑菌率=（对照菌落数-处理菌落数）/对照菌落数×100%。
1.3.4
体外杀菌试验测定。试验时，菌悬液的浓度约为104 cfu/ml。取0.5 ml菌悬液和4.5 ml提取液于无菌小试管中混合均匀（对照组为无菌水），作用至预定时间（5、15 min）后，取0.2 ml菌药混合液接种到装好培养基的培养皿中，用涂布器涂布均匀，每次操作重复3次。将做好的细菌平板倒置放入36～37 ℃恒温培养箱中培养24 h后，将酵母菌培养皿置恒温箱中28 ℃恒温培养48 h后统计菌落个数，统计菌落个数，计算杀菌率[5]。
杀菌率 =（对照菌落数-处理菌落数）/对照菌落数×100%。
2结果与分析
2.17种中草药酒精提取液的抑菌试验
由表1可见，7种中草药的酒精提取液对4种菌有明显的抑制效果。随着药物剂量的增大，对4种菌的抑制效果显著增强。在药物为2.0 ml时，中草药对枯草杆菌的抑菌作用大小依次为大黄>枸骨>千里光>苍术>紫花地丁>半枝莲>地榆，大黄抑菌率为99.4%，效果最好；中草药对酵母菌的抑菌率均在72.9%以上，其中千里光抑菌能力最强，抑菌率为91.5%；中草药对大肠杆菌的抑菌作用大小依次为地榆>苍术>大黄>半枝莲>紫花地丁>千里光>枸骨，地榆抑菌率最高，为97.2%；中草药对金黄色葡萄球菌的抑菌作用大小依次为大黄>地榆>枸骨>千里光>苍术>半枝莲>紫花地丁，大黄抑菌率为88.3%，效果最好。综合抑菌率看，7种中草药提取液对酵母菌抑菌率均较高。
抑菌试验表明，同一中草药对不同细菌的抑制作用亦存在着显著差异，不同中草药对同一种菌抑菌效果也不同。
2.27种中草药酒精提取液的杀菌试验
从表2可看出，7种中草药95%酒精提取液对4种菌均有明显的杀菌效果。在中草药质量浓度为1 g/ml时，随着杀菌时间的延长，杀菌率有显著的提高。靶标菌与药物作用15 min后，中草药对枯草杆菌的杀菌作用大小依次为大黄>枸骨>千里光>紫花地丁>苍术>半枝莲>地榆，大黄杀菌率为92.2%，效果最好；中草药对酵母菌的杀菌率均在57.9%以上，千里光杀菌率最高，为90.7%；中草药对大肠杆菌的杀菌显著，杀菌率均在60.1%以上，大黄杀菌率最高，为94.3%；中草药对金黄色葡萄球菌的杀菌最为显著，杀菌率均在70.0%以上，大黄、地榆杀菌率为100%，效果最好。杀菌试验表明，不同中草药对
同一种细菌的杀菌作用有显著差异，同一中草药对不同菌的杀菌作用亦存在着较大差异。
3结论与讨论
3.1讨论
3.1.1
7种中草药的抑菌试验。7种中草药提取液抑菌率的高低与药剂量有关，中草药剂量越大抑菌率越高；药物的抑菌效应呈现剂量效应；同一中草药对不同菌的抑菌效果也存在着较大的差异，可能是药物的成分对不同菌作用机理不同所致。不同中草药种在相同的浓度下对同一细菌的杀菌效果有明显差异，其原因主要是因为不同中草药所含的有效成分不同所致。目前对于中药抑菌机制的研究报导很少，已知的中药抑菌途径主要在三方面：①干扰微生物的酶系，破坏其正常的新陈代谢，抑制酶的活性；②使微生物的蛋白质疑固和变性，干扰其生存和繁殖；③改变细胞膜的渗透性，使其体内的酶类和代谢产物逸出导致其失活[6]。
3.1.2
7种中草药的杀菌试验。同种中草药在不同作用时间下对同种细菌的杀菌作用效果不同，这是因为作用时间越长，药物中的有效成分对细菌的作用越充分，对菌的杀灭效果越好。不同中草药种在相同的浓度、相同时间下对同一细菌的杀菌效果有明显差异，其原因主要是因为不同中草药所含的有效成分不同所致。
同一中草药对不同菌的杀菌效果也存在着较大的差异。可能是药物的成分对不同菌作用机理不同所致。抑菌能力强的中草药，其杀菌能力也强。
中草药提取液杀菌的作用机理方面的研究还处在探索阶段[7]。中草药所含的活性成分受生长地域、不同季节、植物不同部位、不同提取方法的影响，需要进一步研究不同产地的中草药、采收季节、药物部位、提取方法等因素對中草药活性成分的影响；对杀菌效果好的中草药活性成分进行分离鉴定。
3.2结论
7种中草药具有广谱的抗菌作用， 大黄对4种菌的抑菌率均在87.3%以上、杀菌率在82.0%以上，是7种中草药中抗菌效果最好的。
参考文献
[1]
侯永清，张挺.不同提取工艺对中草药抑菌效果的影响[J].饲料工业，2003，24（2）：9-10.
[2] 吴文君，浏惠霞，朱靖博，等.天然产物杀虫剂量一原理、方法、实践[M].西安：陕西科学技术出版社，1997.
[3] SOMCHIT M N，REEZAL I，ELYSHA NUR I，et al.In vitro antimicrobial activity of ethanol and water extracts of Cassia alata[J].Journal of Ethnopharmacology，2003，84：1-4.
[4] 沈萍，陈向东.微生物学实验[M].4版.北京：高等教育出版社，2007：93-94.
[5] 沈萍，范秀容，李广武.微生物学实验[M].3版.北京：高等教育出版社，1999：100-102.
[6] SHIOTA S，SHIMIZU M，SUGIYAMA J，et al.Mechanisms of action of corilagin and tellimagrandin I that remarkably potentiate the activityof beta-lactams against methicillinresistant Staphylococcus aureus[J].Microbiol Immunol，2004，48（1）：67-73.
[7] 杨玉萍，李艾莲.植物源杀菌剂研究进展[J].中国农业科技导报，2006，8（1）：51-53.
[目的]研究地榆、苍术、紫花地丁、半枝莲、大黄、枸骨、千里光等7种中草药的抑菌、杀菌活性。[方法]选用上述7种中草药用95%的酒精提取其活性成分，对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌等4种菌进行抑菌、杀菌试验测定。[结果]7种中草药具有广谱的抗菌作用， 大黄对4种菌的抑菌率均在82.3%以上、杀菌率在82.0%以上，是7种中草药中抗菌效果最好的。[结论]7种中草药对4种菌均有明显的抑制和杀菌作用。
关键词中草药提取物；植物活性物质；抑菌作用；杀菌作用
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）28-09722-03
Study on Action of Bacteriostasis and Disinfection of Alcohol Extracts from 7 Kinds of Chinese Medicinal Herbs
YIN Lu， HU Renhuo*， QIU Riguang et al
（School of Nuclear Technology and Chemistry & Life Science， Hubei University of Science and Technology， Xianning， Hubei 437100）
Abstract[Objective] To study the antibacterial and sterilization activity of seven kinds of Chinese herbal medicine which are Radix sanguisorbae， Atractylodes rhizome， Violae herba， Portulaca grandiflora hook， Rheum palmatum， Ilex cornuta and Senecio scandens etc. [Method] The active ingredients of the above 7 kinds of Chinese herbal medicine are extracted with 95% alcohol， and then to study the antibacterial and sterilization effect on the four kinds of bacteria： Escherichia coli， Bacillus subtilis， Staphylococcus aureus and Saccharomyces cerevisiae. [Result] 7 kinds of Chinese herbal medicine has a broad spectrum of antibacterial activity， Rheum palmatum which antibacterial rate against four bacteria is above 82.3% and sterilization rate more than 82.0% has the best antimicrobial effect among the 7 kinds of Chinese herbal medicines. [Conclusion] 7 kinds of Chinese herbal medicine has obvious bactericidal effect on 4 kinds of bacteria.
Key wordsHerbal extraction； Plant active ingredient； Antibacterial effect； Sterilization effect
我國的中草药资源非常丰富，我国劳动人民应用中药已有数千年的历史，许多中草药具有抗菌消炎的作用。该课题组在前期研究的基础上，筛选出地榆、苍术、紫花地丁、半枝莲、大黄、枸骨、千里光等7种常见中草药，用95%酒精提取其活性成分，选取大肠杆菌、枯草杆菌菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等常见污染菌作为靶标菌，通过抑菌、杀菌试验，检测中草药对靶标菌的作用效果，为开发绿色杀菌剂提供参考。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1
供试中草药。 地榆（Radix sanguisorbae）、苍术（Atractylodes rhizome）、紫花地丁（Violae herba）半枝莲（Portulaca grandiflora hook）、大黄（Rheum palmatum）、枸骨（Ilex cornuta）、千里光（Senecio scandens），以上7种中草药均购买于咸宁市温泉中药店，烘干备用。
1.1.2
供试菌种。枯草杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌 （Staphyloccocus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、酵母菌（Saccharomyces cerevisiae），上述菌种均由华中农业大学发酵工程室提供。
1.2试验仪器和试剂
1.2.1
试验仪器。DH5000AB型电热恒温培养箱、SW—CJ—1D型单人超净工作台、YX280A手提式不锈钢消毒器、J—2菌落计数器、DH-101电热恒温鼓风干燥箱、84—Ⅱ型加热磁力搅拌器、BCD—216荣事达冰箱。
1.2.2
试验试剂。1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L HCl溶液、75%酒精、95%酒精、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基。 1.3试验方法
1.3.1
菌悬液的配制。将大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌接种在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，37 ℃培养24 h；酵母菌接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，28 ℃培养48 h。
将培养好的菌种，分别用接种环挑取少许菌体于装有无菌水的试管内，震荡均匀，制成菌悬液。用平板菌落计数法测定其菌液浓度，并用稀释法，使菌液含量数为104 cfu/ml，即为供试菌液。
1.3.2
中草药提取液的配制。
将中草药烘干、粉碎，分别用95%酒精[1]常温下萃取4 d[2]，将提取液离心后，减压蒸馏温度约为50～52 ℃，将中草药提取液中的酒精蒸发。然后用蒸馏水定容到质量浓度为1 g/ml，置于0～4 ℃冰箱中备用。
1.3.3
体外抑菌试验测定[3]。将固体培养基加热熔化，每20 ml固体培养基加入已装有预定量中草药提取液（0.5、2.0 ml）的无菌培养皿（直径为15 mm）中，再加入0.2 ml菌液（稀释后菌液浓度约为103个/ml），用涂布器涂布均匀，每一处理重复3次，用无菌水作对照。上述操作均在超净工作台内进行。将细菌培养皿倒置，置36～37 ℃恒温培养24 h，将酵母菌培养皿置恒温箱中28 ℃恒温培养48 h后统计菌落个数，计算抑菌率[4]。抑菌率=（对照菌落数-处理菌落数）/对照菌落数×100%。
1.3.4
体外杀菌试验测定。试验时，菌悬液的浓度约为104 cfu/ml。取0.5 ml菌悬液和4.5 ml提取液于无菌小试管中混合均匀（对照组为无菌水），作用至预定时间（5、15 min）后，取0.2 ml菌药混合液接种到装好培养基的培养皿中，用涂布器涂布均匀，每次操作重复3次。将做好的细菌平板倒置放入36～37 ℃恒温培养箱中培养24 h后，将酵母菌培养皿置恒温箱中28 ℃恒温培养48 h后统计菌落个数，统计菌落个数，计算杀菌率[5]。
杀菌率 =（对照菌落数-处理菌落数）/对照菌落数×100%。
2结果与分析
2.17种中草药酒精提取液的抑菌试验
由表1可见，7种中草药的酒精提取液对4种菌有明显的抑制效果。随着药物剂量的增大，对4种菌的抑制效果显著增强。在药物为2.0 ml时，中草药对枯草杆菌的抑菌作用大小依次为大黄>枸骨>千里光>苍术>紫花地丁>半枝莲>地榆，大黄抑菌率为99.4%，效果最好；中草药对酵母菌的抑菌率均在72.9%以上，其中千里光抑菌能力最强，抑菌率为91.5%；中草药对大肠杆菌的抑菌作用大小依次为地榆>苍术>大黄>半枝莲>紫花地丁>千里光>枸骨，地榆抑菌率最高，为97.2%；中草药对金黄色葡萄球菌的抑菌作用大小依次为大黄>地榆>枸骨>千里光>苍术>半枝莲>紫花地丁，大黄抑菌率为88.3%，效果最好。综合抑菌率看，7种中草药提取液对酵母菌抑菌率均较高。
抑菌试验表明，同一中草药对不同细菌的抑制作用亦存在着显著差异，不同中草药对同一种菌抑菌效果也不同。
2.27种中草药酒精提取液的杀菌试验
从表2可看出，7种中草药95%酒精提取液对4种菌均有明显的杀菌效果。在中草药质量浓度为1 g/ml时，随着杀菌时间的延长，杀菌率有显著的提高。靶标菌与药物作用15 min后，中草药对枯草杆菌的杀菌作用大小依次为大黄>枸骨>千里光>紫花地丁>苍术>半枝莲>地榆，大黄杀菌率为92.2%，效果最好；中草药对酵母菌的杀菌率均在57.9%以上，千里光杀菌率最高，为90.7%；中草药对大肠杆菌的杀菌显著，杀菌率均在60.1%以上，大黄杀菌率最高，为94.3%；中草药对金黄色葡萄球菌的杀菌最为显著，杀菌率均在70.0%以上，大黄、地榆杀菌率为100%，效果最好。杀菌试验表明，不同中草药对
同一种细菌的杀菌作用有显著差异，同一中草药对不同菌的杀菌作用亦存在着较大差异。
3结论与讨论
3.1讨论
3.1.1
7种中草药的抑菌试验。7种中草药提取液抑菌率的高低与药剂量有关，中草药剂量越大抑菌率越高；药物的抑菌效应呈现剂量效应；同一中草药对不同菌的抑菌效果也存在着较大的差异，可能是药物的成分对不同菌作用机理不同所致。不同中草药种在相同的浓度下对同一细菌的杀菌效果有明显差异，其原因主要是因为不同中草药所含的有效成分不同所致。目前对于中药抑菌机制的研究报导很少，已知的中药抑菌途径主要在三方面：①干扰微生物的酶系，破坏其正常的新陈代谢，抑制酶的活性；②使微生物的蛋白质疑固和变性，干扰其生存和繁殖；③改变细胞膜的渗透性，使其体内的酶类和代谢产物逸出导致其失活[6]。
3.1.2
7种中草药的杀菌试验。同种中草药在不同作用时间下对同种细菌的杀菌作用效果不同，这是因为作用时间越长，药物中的有效成分对细菌的作用越充分，对菌的杀灭效果越好。不同中草药种在相同的浓度、相同时间下对同一细菌的杀菌效果有明显差异，其原因主要是因为不同中草药所含的有效成分不同所致。
同一中草药对不同菌的杀菌效果也存在着较大的差异。可能是药物的成分对不同菌作用机理不同所致。抑菌能力强的中草药，其杀菌能力也强。
中草药提取液杀菌的作用机理方面的研究还处在探索阶段[7]。中草药所含的活性成分受生长地域、不同季节、植物不同部位、不同提取方法的影响，需要进一步研究不同产地的中草药、采收季节、药物部位、提取方法等因素對中草药活性成分的影响；对杀菌效果好的中草药活性成分进行分离鉴定。
3.2结论
7种中草药具有广谱的抗菌作用， 大黄对4种菌的抑菌率均在87.3%以上、杀菌率在82.0%以上，是7种中草药中抗菌效果最好的。
参考文献
[1]
侯永清，张挺.不同提取工艺对中草药抑菌效果的影响[J].饲料工业，2003，24（2）：9-10.
[2] 吴文君，浏惠霞，朱靖博，等.天然产物杀虫剂量一原理、方法、实践[M].西安：陕西科学技术出版社，1997.
[3] SOMCHIT M N，REEZAL I，ELYSHA NUR I，et al.In vitro antimicrobial activity of ethanol and water extracts of Cassia alata[J].Journal of Ethnopharmacology，2003，84：1-4.
[4] 沈萍，陈向东.微生物学实验[M].4版.北京：高等教育出版社，2007：93-94.
[5] 沈萍，范秀容，李广武.微生物学实验[M].3版.北京：高等教育出版社，1999：100-102.
[6] SHIOTA S，SHIMIZU M，SUGIYAMA J，et al.Mechanisms of action of corilagin and tellimagrandin I that remarkably potentiate the activityof beta-lactams against methicillinresistant Staphylococcus aureus[J].Microbiol Immunol，2004，48（1）：67-73.
[7] 杨玉萍，李艾莲.植物源杀菌剂研究进展[J].中国农业科技导报，2006，8（1）：51-53.