【摘 要】
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目的:探究通过脂质体转染技术介导重组质粒pSecTag2HygroC/CD13-1/RFP转染293细胞的方法。方法:采用Lipofectamine 2000方法将包含目的基因pSecTag2HygroC/CD13-1/RFP的质粒
【机 构】
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温州医学院附属育英儿童医院儿童重症监护病区,温州医学院附属第一医院血液科,
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目的:探究通过脂质体转染技术介导重组质粒pSecTag2HygroC/CD13-1/RFP转染293细胞的方法。方法:采用Lipofectamine 2000方法将包含目的基因pSecTag2HygroC/CD13-1/RFP的质粒转染293细胞。在转染24 h后于荧光显微镜下观察红色荧光出现情况。收集并浓缩稳定转染后293细胞的上清液,提取细胞膜蛋白和胞浆蛋白,采用Western blot方式判断转染细胞是否表达目的蛋白。结果:①荧光显微镜下可观察到红色荧光蛋白(RFP)发出红色荧光。②Western blot鉴定结果:提取稳定转染的293细胞胞浆蛋白Western blot鉴定可见到大小为62 kD左右的条带。浓缩的上清蛋白与提取的胞膜蛋白West-ern blot鉴定未见到目的蛋白表达。结论:应用脂质体转染技术,成功介导目的基因pSecTag2HygroC/CD13-1/RFP转染到293细胞中,为进一步研究重组CD13单链抗体对血液肿瘤的靶向杀伤作用打下了实验基础。
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