【摘 要】
:
目的 建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法应用SYBR-Greenl进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1,SYBR-PCR),检测左缺(-α^4.2)、右缺(-α^3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation calve,D
【机 构】
:
首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心,北京100020,中国医学科学院基础医学研究所,首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心,北京100020,首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中
论文部分内容阅读
目的 建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法应用SYBR-Greenl进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1,SYBR-PCR),检测左缺(-α^4.2)、右缺(-α^3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation calve,DC)和Tm(melting temperature)值分析。PCR产物重组到pCR2.1,重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度,确定两种等位基因型(-α^4.2,-α^3.7)的检测下限,并对110份DNA样品进行检测。结果检测-α^4.2和-α^3.7的PCR产物长度分别为1.65kb、1.9kb,Tm分别为(81.5±0.5)℃、(82.5±0.5)℃,检测下限分别为9×10^2个拷贝、4.3×10^2个拷贝。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍。结论SYBR-Greenl实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm分析可以灵敏、准确地检测-α^4.2、-α^3.7、αα(包括α^Tα)及--^SEA4种等位基因,从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断。该技术具有自动化程度高,不需荧光标记探针,成本低,易质控,防污染,高通量等优点,适于临床推广应用。
其他文献
患者 32岁,G2P0+1,于2006年11月3日17+2周孕因胎儿宫内畸形前来我室咨询.本次孕前及孕期否认不良因素接触史,但妊娠早期因腹痛服用保胎药"保胎灵"治疗,时间剂量不详。
目的 研究西藏高原夏尔巴人群缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1,alpha subunit;HIF1A)基因(HIF1A)第12外显子1772(C→T)、1790(G→A)多态性与高原低氧适应相关性.方法 选取世居西藏高原夏尔巴族148人及广东汉族健康个体90人的血样,提取白细胞基因组DNA,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain
目的 探索应用优化的三色引物原位标记技术同时标记多条人类外周血淋巴细胞培养中期染色体的可行性.方法 采用双色引物原位标记预实验检测外周血中期淋巴细胞的X、Y染色体以摸索和优化引物应用条件和反应顺序.以优化的三色技术同时标记正常样本及克氏综合征样本(47,XXY)的18、X、Y染色体以验证其有效性.结果 在3 h之内特异性的同时标记了18、X、Y染色体,双色和三色反应的标记率均达到90%以上.克氏综
目的 研究内蒙古地区蒙古族、鄂温克族、鄂伦春族、达斡尔族民族X染色体遗传结构及其变化规律,了解9个位点的法医学、群体遗传学应用价值及4个民族间的亲属关系.方法 以9个X短串联重复序列(short tandem repeats, X-STR)位点(DXS6789,DXS101,DXS8378,DXS7132,DXS7133,DXS7423,DXS6804,DXS6799和HPRTB)作为遗传标记,通
患者男,30岁.其妻怀孕两次,均于孕50~60天自然流产.夫妇体健,表型及智力均正常,非近亲结婚,无不良因素接触史. 细胞遗传学检查:取患者夫妇外周血淋巴细胞培养,常规方法制片,G显带分析,镜下计数40个中期分裂相,分析15个,患者核型为46,XY,t(20;22)(20qter→20pter∷22q12→22qter),其妻核型正常。
患者 女,30岁,婚后3年内习惯性流产6次。4次流产发生在加余天,2次流产发生于妊娠2个月。孕期无明显感染史,亦无药物、X射线等有害因素接触史。查体表型及智力正常。妇科检查正常。非近亲婚配,配偶身体健康,家族中无类似病史。细胞遗传学检查:取外周血常规制备染色体标本,G显带,镜下计数50个中期分裂相,分析5个核型,患者核型为46,
患者 女,28岁,婚后于2000年9月孕1月余"不全流产",2003年2月,2004年12月"稽留流产",3次均无明显诱因,而且每次都需要治疗才能怀孕,于2006年4月生育一女孩,现11个月,无明显异常,未做染色体检查,孕期拒绝做产前诊断。
为了尽快将我国医学遗传学、人类遗传学及相关领域中新发现和重大研究成果在本刊发表,我们按照中华医学会系列杂志的管理要求,对作者的来稿开辟了“快速通道”。为了使广大作者、读者了解和充分利用“快速通道”,特将“快速通道”选稿原则和申请要求公布如下:(1)文章有重大创新,为国内首创或达到国际先进水平的研究或临床论文,均可申请“快速通道”发表;(2)作者本人提出进入“快速通道”书面申请,并提供所在单位科研部
患者 女,23岁,身体健康,表型正常.怀孕2次,第1次孕80天左右自然流产;第2次足月顺产一女婴,伴消化道畸形,腹部肿块,出生24h后死亡。
目的 研究内皮脂酶基因启动子-384A>C位点多态性与正常汉族中国人及内源性高甘油三酯血症(hypertriglyceridemia,HTG)患者血脂及载脂蛋白水平是否存在关联,为探讨HTG发病的分子遗传基础提供依据.方法采用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性分析法对214名正常人和103例HTG患者内皮脂酶基因-384A>C位点多态性进行分析,采用酶法和单向免疫扩散法对血脂和载脂蛋白水平进行测定