论文部分内容阅读
摘要 由于长期对藏木香野生资源的采挖，使其现已濒临灭绝，通过组培快繁技术进行繁殖是解决藏木香资源短缺的有效途径之一。以藏木香的芽为外植体进行离体培养与植株再生的研究。结果表明：藏木香的继代增殖培养基以MS BA 1.4 mg/L NAA 0.5 mg/L为宜，每个外植体可平均产生4.5个芽；生根培养基以1/2 MS为宜，生根率最高可达96%。
关键词 藏木香；离体培养；植株再生
中图分类号 S567.23 9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）14-0060-01
藏木香，藏名玛奴，为菊科多年生草本植物，株高1.5 m左右。根圆锥状或块状，木质化。茎直立，中上部有分枝。叶披针形，叶缘锯齿状，基生叶有长柄，茎生叶无柄，叶背及茎被短绒毛，花黄色，头状花序，花果期7—9月，以根入药。可止痛、安胎、健脾和胃、调气解郁，用于治疗肋间神经痛、胸壁挫伤、岔气作痛、胎动不安、慢性胃炎、胃肠功能紊乱等症[1-5]。
目前，药用植物资源需求量剧增，也是藏药材资源趋于濒危的重要因素。保护藏药材资源的修复和再生，防止退化和灭绝，是保障药用植物资源的可持续利用和藏药产业可持续发展的关键措施。随着国内外药用需求量的增大，过度采集导致了藏木香野生资源的急剧下降，价格大幅上升，而价格上升更进一步刺激了掠夺性开采[1-2，4-6]，导致野生资源更趋日益稀少，处于濒危状态。目前，有关藏木香的研究主要集中在人工栽培技术及药用成分生理、生化研究方面，而关于藏木香组培快繁技术的研究尚未见报道。本研究以藏木香芽为外植体，建立了藏木香离体再生体系，对藏木香实现资源保存和人工种植，使天然更新与人工抚育相结合，使藏药资源的开发利用与保护步入良性发展的轨道，才能达到经济、社会、生态效益的统一[1-2，7]。
1 材料与方法
1.1 试验地点
试验地点设在西藏农牧科学院蔬菜研究所组培室，试验时间为2014年4月至2015年1月。
1.2 试验材料
供试材料为从西藏林芝地区采集的藏木香种子[1-3，6-8]。基本培养基为MS，琼脂为0.7%，碳源为3%蔗糖，并在121 ℃条件下高压灭菌20 min[1-5]。
1.3 试验方法
1.3.1 藏木香无菌体系的建立。取西藏农牧科学院蔬菜研究所科技示范园区温室内培养逾1个月的藏木香幼苗，剪去叶子和根，留芽，用70%酒精迅速过一下，用无菌水冲洗3遍，再用0.1%升汞表面消毒3～5 min，倒去消毒液，用无菌水冲洗5～6遍，接种在MS培养基中置12 h光周期，1 500 lx光强下，（21±1）℃的光照培养室中培养[1-4]。
1.3.2 藏木香不定芽的增殖培养。为筛选最佳的增殖培养基，将经芽萌发的藏木香不定芽接种于MS附加不同浓度的6-BA与NAA组合的培养基中，30 d后统计其增殖系数。光周期12 h/d，光强1 500 lx，温度（21±1）℃。
1.3.3 藏木香不定芽的生根培养。将藏木香不定芽接种到添加不同浓度IAA的MS和1/2 MS培养基中进行根的诱导，30 d后观察其生根情况。
2 结果与分析
2.1 外植体发芽情况
藏木香幼苗的芽在接种15 d后开始萌发生长，由于幼苗腋芽和土壤接触带有很多杂菌，不能够彻底进行外植体消毒，外植体污染率达到60%。
2.2 激素对藏木香不定芽增殖的影响
从表1可以看出，为了繁殖大量的藏木香有效的无菌试管苗，把获得的无菌不定芽接种于增殖培养基中，每30 d转接继代1次，研究6-BA、NAA植物生长调节剂的组合配比对藏木香不定芽增殖的影响。结果表明，不定芽萌发可形成1～6个丛生芽，增殖系数以MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0. 5 mg/L最大，达4.60，但植株叶片发生卷曲，而MS 6-BA1.4 mg/L NAA 0. 5 mg/L培养基中且单株增殖至3～6个植株，增殖系数为4.50，且植株生长健壮。因此，对于藏木香不定芽的增殖，MS 6-BA 1.4 mg/L NAA 0.5 mg/L是最好的激素组合。
2.3 生根培养
当藏木香不定芽长至1.5 cm以上，带有2～3个叶片时转接到添加不同浓度IAA的MS和1/2 MS的培养基中，结果如表2所示。可以看出，藏木香不定芽在添加不同浓度IAA的MS和1/2 MS培养基中均产生根系，其中在1/2 MS的培养基中均能生根，生根率最高达96%。
3 结论与讨论
当细胞分裂素6-BA的浓度太高时，藏木香植株叶片会发生严重的卷曲现象[1-6]，这可能是细胞分裂素的浓度过高所致；而细胞分裂素6-BA的浓度太低时无菌苗不会发生增殖。因此，在藏木香无菌苗增殖培养中要严格控制细胞分裂素6-BA的浓度。
该试验结果表明，利用组织培养方法快速繁殖藏木香无性系是可行的，可能成为藏木香快速繁殖的一个途径[1-8]。为使试验成果应用到实际药材生产中去，还需解决降低试管苗成本和提高试管苗成活率等问题，以进一步实现从无性繁殖系的快速繁殖到藏木香育苗工厂化，为藏木香生产实践开辟新道路。
4 参考文献
[1] 曾钰婷，刘正玉，王敬龙，等.利用组织培养方法快速繁殖螃蟹甲技术[J].西藏农业科技，2009（2）：26-28.
[2] 西藏濒危藏药资源保护与开发利用成效显著[J].西藏科技，2007（12）：F0003.
[3] 李良玉，占堆.藏药资源的保护与开发[J].社会科学战线，2007（5）：80-83.
[4] 杨凯龙，杨立新，赵燕强.迪庆州藏药文化与药用植物多样性保护[J].林业调查规划，2011（4）：100-104.
[5] 张浩.青藏高原珍稀濒危药用植物的资源与保护[J].世界科学技术，中医药现代化，2003（1）：66-69.
[6] 邹兴强.藏木香栽培技术[J].四川农业科技，2006（9）：29.
[7] 马雄，马海财，马怀义，等.藏药植物藏木香的人工栽培与管理[J].林业实用技术，2010（8）：47.
[8] 王玉林，马雄，常毓巍.青藏高原东缘藏药植物藏木香栽培技术[J].甘肃农业，2009（7）：99-100.
关键词 藏木香；离体培养；植株再生
中图分类号 S567.23 9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）14-0060-01
藏木香，藏名玛奴，为菊科多年生草本植物，株高1.5 m左右。根圆锥状或块状，木质化。茎直立，中上部有分枝。叶披针形，叶缘锯齿状，基生叶有长柄，茎生叶无柄，叶背及茎被短绒毛，花黄色，头状花序，花果期7—9月，以根入药。可止痛、安胎、健脾和胃、调气解郁，用于治疗肋间神经痛、胸壁挫伤、岔气作痛、胎动不安、慢性胃炎、胃肠功能紊乱等症[1-5]。
目前，药用植物资源需求量剧增，也是藏药材资源趋于濒危的重要因素。保护藏药材资源的修复和再生，防止退化和灭绝，是保障药用植物资源的可持续利用和藏药产业可持续发展的关键措施。随着国内外药用需求量的增大，过度采集导致了藏木香野生资源的急剧下降，价格大幅上升，而价格上升更进一步刺激了掠夺性开采[1-2，4-6]，导致野生资源更趋日益稀少，处于濒危状态。目前，有关藏木香的研究主要集中在人工栽培技术及药用成分生理、生化研究方面，而关于藏木香组培快繁技术的研究尚未见报道。本研究以藏木香芽为外植体，建立了藏木香离体再生体系，对藏木香实现资源保存和人工种植，使天然更新与人工抚育相结合，使藏药资源的开发利用与保护步入良性发展的轨道，才能达到经济、社会、生态效益的统一[1-2，7]。
1 材料与方法
1.1 试验地点
试验地点设在西藏农牧科学院蔬菜研究所组培室，试验时间为2014年4月至2015年1月。
1.2 试验材料
供试材料为从西藏林芝地区采集的藏木香种子[1-3，6-8]。基本培养基为MS，琼脂为0.7%，碳源为3%蔗糖，并在121 ℃条件下高压灭菌20 min[1-5]。
1.3 试验方法
1.3.1 藏木香无菌体系的建立。取西藏农牧科学院蔬菜研究所科技示范园区温室内培养逾1个月的藏木香幼苗，剪去叶子和根，留芽，用70%酒精迅速过一下，用无菌水冲洗3遍，再用0.1%升汞表面消毒3～5 min，倒去消毒液，用无菌水冲洗5～6遍，接种在MS培养基中置12 h光周期，1 500 lx光强下，（21±1）℃的光照培养室中培养[1-4]。
1.3.2 藏木香不定芽的增殖培养。为筛选最佳的增殖培养基，将经芽萌发的藏木香不定芽接种于MS附加不同浓度的6-BA与NAA组合的培养基中，30 d后统计其增殖系数。光周期12 h/d，光强1 500 lx，温度（21±1）℃。
1.3.3 藏木香不定芽的生根培养。将藏木香不定芽接种到添加不同浓度IAA的MS和1/2 MS培养基中进行根的诱导，30 d后观察其生根情况。
2 结果与分析
2.1 外植体发芽情况
藏木香幼苗的芽在接种15 d后开始萌发生长，由于幼苗腋芽和土壤接触带有很多杂菌，不能够彻底进行外植体消毒，外植体污染率达到60%。
2.2 激素对藏木香不定芽增殖的影响
从表1可以看出，为了繁殖大量的藏木香有效的无菌试管苗，把获得的无菌不定芽接种于增殖培养基中，每30 d转接继代1次，研究6-BA、NAA植物生长调节剂的组合配比对藏木香不定芽增殖的影响。结果表明，不定芽萌发可形成1～6个丛生芽，增殖系数以MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0. 5 mg/L最大，达4.60，但植株叶片发生卷曲，而MS 6-BA1.4 mg/L NAA 0. 5 mg/L培养基中且单株增殖至3～6个植株，增殖系数为4.50，且植株生长健壮。因此，对于藏木香不定芽的增殖，MS 6-BA 1.4 mg/L NAA 0.5 mg/L是最好的激素组合。
2.3 生根培养
当藏木香不定芽长至1.5 cm以上，带有2～3个叶片时转接到添加不同浓度IAA的MS和1/2 MS的培养基中，结果如表2所示。可以看出，藏木香不定芽在添加不同浓度IAA的MS和1/2 MS培养基中均产生根系，其中在1/2 MS的培养基中均能生根，生根率最高达96%。
3 结论与讨论
当细胞分裂素6-BA的浓度太高时，藏木香植株叶片会发生严重的卷曲现象[1-6]，这可能是细胞分裂素的浓度过高所致；而细胞分裂素6-BA的浓度太低时无菌苗不会发生增殖。因此，在藏木香无菌苗增殖培养中要严格控制细胞分裂素6-BA的浓度。
该试验结果表明，利用组织培养方法快速繁殖藏木香无性系是可行的，可能成为藏木香快速繁殖的一个途径[1-8]。为使试验成果应用到实际药材生产中去，还需解决降低试管苗成本和提高试管苗成活率等问题，以进一步实现从无性繁殖系的快速繁殖到藏木香育苗工厂化，为藏木香生产实践开辟新道路。
4 参考文献
[1] 曾钰婷，刘正玉，王敬龙，等.利用组织培养方法快速繁殖螃蟹甲技术[J].西藏农业科技，2009（2）：26-28.
[2] 西藏濒危藏药资源保护与开发利用成效显著[J].西藏科技，2007（12）：F0003.
[3] 李良玉，占堆.藏药资源的保护与开发[J].社会科学战线，2007（5）：80-83.
[4] 杨凯龙，杨立新，赵燕强.迪庆州藏药文化与药用植物多样性保护[J].林业调查规划，2011（4）：100-104.
[5] 张浩.青藏高原珍稀濒危药用植物的资源与保护[J].世界科学技术，中医药现代化，2003（1）：66-69.
[6] 邹兴强.藏木香栽培技术[J].四川农业科技，2006（9）：29.
[7] 马雄，马海财，马怀义，等.藏药植物藏木香的人工栽培与管理[J].林业实用技术，2010（8）：47.
[8] 王玉林，马雄，常毓巍.青藏高原东缘藏药植物藏木香栽培技术[J].甘肃农业，2009（7）：99-100.