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（哈高科白天鹅药业）
摘 要：本文采用高校液相测定了芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g）为流动相，检测波长为265nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。盐酸小檗碱在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。盐酸小檗碱的平均回收率为99.5%，RSD为0.86%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量测定。
关键词：芪黄颗粒；盐酸小檗碱；含量
芪黄颗粒主要用于治疗鼻咽癌癌前病变之气虚郁热等症，具有益气解毒、生津利咽等作用。盐酸小檗碱对溶血性链球菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、脑膜炎球菌、金葡菌、霍乱弧菌、志贺痢疾杆菌、伤寒杆菌、白喉杆菌等有较强的抑制作用，对阿米巴原虫、流感病毒、鉤端螺旋体也有一定抑制作用。临床盐酸小檗碱主要用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染、眼结膜炎、口舌生疮、烧烫伤、心率失常、高血压、糖尿病、化脓性中耳炎等[1-2]。高效液相色谱法又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等，已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。本文采用高校液相测定了芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量。
1 仪器与试药
HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；CC-304Bvpc单加热型高温不锈钢槽（北京赛美思仪器设备有限公司）；Dura 12/24超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计（屹谱仪器制造（上海）有限公司）；SCQ-7201E双频加热型超声波清洗机（上海声彦超声波仪器有限公司）；FR224CN奥豪斯电子天平（上海书培实验设备有限公司）；LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）。盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（山东浩中化工科技有限公司）、乙醇（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、磷酸（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、甲醇（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、冰醋酸（济南英出化工科技有限公司）、磷酸氢二钠（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、十二烷基硫酸钠（山东浩中化工科技有限公司）、磷酸二氢钾（山东浩中化工科技有限公司）、三乙胺（山东浩中化工科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g）为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取芪黄颗粒，研细，精密称取，加60毫升50%乙醇溶液超声处理0.5小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用50%乙醇溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品约5mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含20μg的溶液，作為对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取除黄连外等药材和辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在盐酸小檗碱出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，盐酸小檗碱对照品在5～50μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
称取同一批的芪黄颗粒样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.73%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.2项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品盐酸小檗碱峰面积积分值的RSD为0.75%。结果表明盐酸小檗碱至少在4小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的盐酸小檗碱对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.86%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定芪黄颗粒三批样品中盐酸小檗碱的含量，含量为15.2mg/g、15.6mg/g、15.2mg/g。
3 讨论
分别考察乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g），乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2.0）（30∶70），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液（含三乙胺0.5%，磷酸调pH至3.0）（40：60），磷酸盐缓冲液一甲醇（70：30）不同比例的流动相，结果以乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量测定。芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量应不少于15mg/g。
参考文献
[1]伍兆锋，温敏杰，赖越元，夏金堂，蔡文松，徐波，李书华.盐酸小檗碱对血管平滑肌细胞增殖的干预研究[J].广州医学院学报，2013（04）.
[2]魏敬，蒋建东，吴锦丹，王书奎，王自正，潘淮宁，戴苏泉.盐酸小檗碱的调脂作用的研究[J].中华糖尿病杂志，2005（01）.
[3]高鹏，王晓南，韦霞.高效液相色谱法测定一清颗粒中盐酸小檗碱的含量[J].白求恩军医学院学报，2008（03）.
[4]梁海春，石书江，李一圣，谭丽容，赖正权，苏子仁，曾惠芳.HPLC法测定加味胃炎消片中野黄芩苷、盐酸小檗碱的含量[J].中药新药与临床药理，2011（01）.
[5]蔡清宇，张沂，郝特，仝会娟，康琛，李曼玲.HPLC法测定舒利通颗粒中巴马丁和小檗碱的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010（02）.
摘 要：本文采用高校液相测定了芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g）为流动相，检测波长为265nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。盐酸小檗碱在5～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。盐酸小檗碱的平均回收率为99.5%，RSD为0.86%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量测定。
关键词：芪黄颗粒；盐酸小檗碱；含量
芪黄颗粒主要用于治疗鼻咽癌癌前病变之气虚郁热等症，具有益气解毒、生津利咽等作用。盐酸小檗碱对溶血性链球菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、脑膜炎球菌、金葡菌、霍乱弧菌、志贺痢疾杆菌、伤寒杆菌、白喉杆菌等有较强的抑制作用，对阿米巴原虫、流感病毒、鉤端螺旋体也有一定抑制作用。临床盐酸小檗碱主要用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染、眼结膜炎、口舌生疮、烧烫伤、心率失常、高血压、糖尿病、化脓性中耳炎等[1-2]。高效液相色谱法又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等，已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。本文采用高校液相测定了芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量。
1 仪器与试药
HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）；CC-304Bvpc单加热型高温不锈钢槽（北京赛美思仪器设备有限公司）；Dura 12/24超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；屹谱仪器U-1810准双光束紫外可见分光光度计（屹谱仪器制造（上海）有限公司）；SCQ-7201E双频加热型超声波清洗机（上海声彦超声波仪器有限公司）；FR224CN奥豪斯电子天平（上海书培实验设备有限公司）；LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）。盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（山东浩中化工科技有限公司）、乙醇（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、磷酸（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、甲醇（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、冰醋酸（济南英出化工科技有限公司）、磷酸氢二钠（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、十二烷基硫酸钠（山东浩中化工科技有限公司）、磷酸二氢钾（山东浩中化工科技有限公司）、三乙胺（山东浩中化工科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g）为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取芪黄颗粒，研细，精密称取，加60毫升50%乙醇溶液超声处理0.5小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用50%乙醇溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取盐酸小檗碱对照品约5mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含20μg的溶液，作為对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取除黄连外等药材和辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在盐酸小檗碱出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，盐酸小檗碱对照品在5～50μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
称取同一批的芪黄颗粒样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.73%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.2项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品盐酸小檗碱峰面积积分值的RSD为0.75%。结果表明盐酸小檗碱至少在4小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的盐酸小檗碱对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.86%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定芪黄颗粒三批样品中盐酸小檗碱的含量，含量为15.2mg/g、15.6mg/g、15.2mg/g。
3 讨论
分别考察乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g），乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2.0）（30∶70），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液（含三乙胺0.5%，磷酸调pH至3.0）（40：60），磷酸盐缓冲液一甲醇（70：30）不同比例的流动相，结果以乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸钠0.1g）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量测定。芪黄颗粒中盐酸小檗碱的含量应不少于15mg/g。
参考文献
[1]伍兆锋，温敏杰，赖越元，夏金堂，蔡文松，徐波，李书华.盐酸小檗碱对血管平滑肌细胞增殖的干预研究[J].广州医学院学报，2013（04）.
[2]魏敬，蒋建东，吴锦丹，王书奎，王自正，潘淮宁，戴苏泉.盐酸小檗碱的调脂作用的研究[J].中华糖尿病杂志，2005（01）.
[3]高鹏，王晓南，韦霞.高效液相色谱法测定一清颗粒中盐酸小檗碱的含量[J].白求恩军医学院学报，2008（03）.
[4]梁海春，石书江，李一圣，谭丽容，赖正权，苏子仁，曾惠芳.HPLC法测定加味胃炎消片中野黄芩苷、盐酸小檗碱的含量[J].中药新药与临床药理，2011（01）.
[5]蔡清宇，张沂，郝特，仝会娟，康琛，李曼玲.HPLC法测定舒利通颗粒中巴马丁和小檗碱的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010（02）.