【摘 要】
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目的 建立一种简便、快速的血友病A(hemophilia A,HA)基因突变筛查方法学,并用于直接基因诊断及携带者筛查.方法 对于临床确诊的24例血友病A患者和家系女性成员,首先采用倒位PCR及PCR技术,检测是否为FⅧ基因第22、1内含子倒位或倒位携带者;对非倒位者则用PCR扩增FⅧ基因26个外显子,继而应用构象敏感凝胶电泳(conformation sensitive gel electrop
【机 构】
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DepartmentofPathologyandMelecularMedicine,RichardsonLaboratoryofQueen'sUniversity,Canada,安徽医科大学附属省立
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目的 建立一种简便、快速的血友病A(hemophilia A,HA)基因突变筛查方法学,并用于直接基因诊断及携带者筛查.方法 对于临床确诊的24例血友病A患者和家系女性成员,首先采用倒位PCR及PCR技术,检测是否为FⅧ基因第22、1内含子倒位或倒位携带者;对非倒位者则用PCR扩增FⅧ基因26个外显子,继而应用构象敏感凝胶电泳(conformation sensitive gel electrophoresis,CSGE)技术对37个扩增片段进行突变筛查,阳性者予以进一步测序验证;据突变类型,对非倒位HA先证者家系女性成员直接测序或行CSGE检测,以判读其是否为携带者.结果 24个HA家系中,7例先证者FⅧ基因第22内含子倒位检测为阳性,未发现第1内含子倒位;13个有家族史及3个散发非倒位HA家系中均存在FⅧ基因不同外显子区的单碱基突变,1例未检出突变.本研究中,24个家系中基因分型诊断及携带者筛查阳性率、可诊断率分别为94.12%(16/17),100%(17/17).结论 PCR-CSGE检测HA单碱基突变高度敏感、特异;FⅧ基因第22、1内含子检测联合PCR-CSGE基因分型诊断技术及核苷酸测序可对所有的HA家系(含散发)进行直接基因诊断,理论上可筛查新突变并明确其突变类型.该法简便、快速、成本低,在HA直接基因诊断及携带者筛查中优势独特,应具重要应用价值。
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