【摘 要】
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采用改良的CTAB法提取珙桐愈伤组织DNA,通过单因素试验分析了退火温度、循环次数、模板用量、d NTP浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度对珙桐愈伤组织ISSR-PCR扩增结果的影响
【机 构】
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四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室
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采用改良的CTAB法提取珙桐愈伤组织DNA,通过单因素试验分析了退火温度、循环次数、模板用量、d NTP浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度对珙桐愈伤组织ISSR-PCR扩增结果的影响。结果表明,适宜的珙桐愈伤组织ISSR-PCR扩增条件是:25μl PCR反应体积中,20 ng模板DNA,0.4 mmol/Ld NTP,1.0U Taq DNA聚合酶,0.8μmol/L引物。最佳的扩增程序为:预变性94℃5 min;变性94℃45 S,退火55.1℃45 S,延伸72℃2 min,共45个循环;后延伸72℃7 min。
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