探讨微RNA(miR)－221诱导PC－9肺癌细胞对吉非替尼的耐药机制。

应用慢病毒空载对照(LV－NC)和LV－miR－221转染PC－9细胞并建立细胞稳转株PC－9/NC和PC－9/miR－221。荧光定量PCR法检测稳转细胞株中miR－221的相对表达量；细胞计数试剂盒(CCK－8法)检测吉非替尼(0～4 μmol/L)对细胞生长增殖的影响；流式细胞术检测吉非替尼对细胞凋亡的影响；荧光定量PCR法和免疫荧光法检测凋亡酶激活因子－1(APAF－1)mRNA和APAF－1蛋白相对表达量；双荧光素酶报告基因实验检测APAF－1与miR－221的关系；Western印迹检测表皮生长因子受体(EGFR)及其磷酸化(p－EGFR)和APAF－1、剪切的半胱氨酸/天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved－caspase－3)蛋白相对表达量。

PC－9/NC细胞中miR－221的相对表达量显著低于PC－9/miR－221细胞[(1.00±0.082)比(40.24±0.017)](P<0.01)；PC－9/NC细胞半数抑制浓度(IC₅₀)显著低于PC－9/miR－221细胞[(IC₅₀ ＝0.1 μmol/L)比(IC₅₀>4 μmol/L)](P<0.05)；PC－9/NC细胞凋亡率显著高于PC－9/miR－221细胞[(33.42±4.28)%比(10.27±1.12)%](P<0.05)；PC－9/NC细胞中APAF－1mRNA的表达量显著高于PC－9/miR－221细胞中[(1.000＋0.069)比(0.701±0.072)](P<0.05)，PC－9/NC细胞中APAF－1蛋白的相对表达量明显高于PC－9/miR－221细胞。共转染荧光素酶质粒pmir－REPORT－APAF－1－wt和miR－221a模拟物后，miR－221a抑制荧光素酶活性显著高于转染miRNA阴性对照组(P<0.01)；吉非替尼均可下调PC－9/NC和PC－9 /miR－221细胞中的p－EGFR，PC－9/miR－221细胞中APAF－1、Cleaved－caspase－3蛋白明显低于PC－9/NC细胞，吉非替尼上调PC－9/NC细胞中的APAF－1、Cleaved－caspase－3等促凋亡蛋白表达水平显著高于PC－9/miR－221细胞(P<0.05)。

miR－221可能通过下调APAF－1的表达诱导PC－9细胞对吉非替尼耐药。