RNA干扰沉默AMPK对前列腺癌细胞生物学行为影响

来源 :中华肿瘤防治杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jojoy9912004
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目的细胞能量代谢的调控因子腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)与肿瘤的发生、发展和转移密切相关,且在前列腺癌中研究较少。本研究探讨siRNA转染下调AMPK表达对人前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响。方法将合成AMPK干扰序列转染至人前列腺癌细胞系PC-3作为实验组(AMPK抑制组),并以空白组(未做任何处理)、阴性对照组(转染阴性干扰片段)作为对照,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中AMPK表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中Ki-67和VEGF-A的mRNA表达情况。用细胞增殖检测试剂盒8(cell counting kit 8,CCK8)法检测细胞的增殖能力,Transwell法检测AMPK对细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 AMPK抑制组细胞AMPK的mRNA表达水平为0.083±0.039,与空白组(1.014±0.194)和阴性对照组(0.841±0.302)相比显著降低,差异有统计学意义,F=34.786,P<0.001;AMPK抑制组细胞AMPK的蛋白表达水平为0.725±0.041,与空白组(2.108±0.400)和阴性对照组(1.461±0.405)相比显著降低,差异有统计学意义,F=13.238,P=0.006。AMPK抑制组细胞Ki-67的mRNA表达水平为0.731±0.045,与空白组(1.034±0.304)和阴性对照组(0.838±0.234)相比,差异无统计学意义,F=1.424,P=0.312;AMPK抑制组细胞VEGF-A的mRNA表达水平为0.542±0.162,与空白组(1.009±0.170)和阴性对照组(1.163±0.546)相比,差异无统计学意义,F=2.662,P=0.149。沉默AMPK基因后,CCK8结果显示,PC-3细胞的增殖能力在48、72和96h显著降低,F值分别为273.206、290.868和90.377,均P<0.001;AMPK抑制组细胞侵袭数目为36.866±9.226,与空白组(56.333±7.087)和阴性对照组(51.866±5.717)相比显著降低,差异有统计学意义,F=27.843,P<0.001;AMPK抑制组细胞迁移数目为39.533±9.132,与空白组(64.200±4.901)和阴性对照组(57.266±4.787)相比显著降低,差异有统计学意义,F=55.863,P<0.001。结论特异性抑制AMPK能够引起人前列腺癌细胞PC-3生物学行为的改变,抑制PC-3的增殖、侵袭和迁移能力,从而抑制肿瘤的发生发展,但其分子机制可能不是通过调控Ki-67和VEGF-A而发挥作用。
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