【摘 要】
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目的:确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体(mAb)和抗体片段的制备工艺路线。方法:以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′,利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab
【机 构】
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浙江工业大学药学院; 杭州九源基因工程有限公司;
【基金项目】
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浙江省重大科技攻关资助项目(2005C13025)
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目的:确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体(mAb)和抗体片段的制备工艺路线。方法:以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′,利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基,通过体内和体外T细胞增殖实验,考查修饰后的抗体和抗体片段的免疫活性。结果:较佳的修饰工艺条件为:在pH9.0硼酸缓冲液,反应温度25℃,抗体浓度0.2g/L,抗体和聚乙二醇摩尔比为1∶20,反应3h。修饰后抗CD3mAb全抗,对T淋巴细胞增殖抑制活性下降了32.3%,抗体Fab′下降了8.0%,PEG化Fab′下降了19.9%。利用ELISA检测血液中修饰后的抗体和抗体片段的半衰期。结果显示mPEG修饰后抗体和抗体片段血药浓度降低明显减缓,修饰后抗CD3抗体半衰期从2.66h延长到8.72h,延长了3.28倍。而修饰后抗体Fab′片段半衰期从2.21h延长到4.17h,延长了1.90倍。结论:利用聚乙二醇修饰抗体和抗体片段,提高了抗体半衰期,且无细胞毒性,活性损失较小,该技术具有较高的可行性,可极大地提高mAb尤其是非人源性抗体在临床上的应用。
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