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摘 要：目的 探讨糖尿病患者血清谷氨酸脱羧酶抗体（GAD）、胰岛细胞抗体（ICA）和胰岛素自身抗体（IAA）的变化及联合检测的临床意义。方法用免疫印迹技术 对86例1型糖尿病（DMl）患者158例2型糖尿病（DM2）患者血清中GAD-Ab、ICA和IAA的阳性率并进行对比分析。结果表明，有19人IAA-5.8KD为阳性，占所检测病人的2.16%，有14人ICA-40KD为阳性，占所检测病人的1.59%，有1人ICA-64KD阳性；有30人GADA-65KD为阳性，占所检测病人的3.4%，；有2人ICA（IA-2）-120KD为阳性；IAA-5.8KD、GADA-65KD阳性4人；ICA-40KD、GADA-65KD阳性2人；GADA-65KD、ICA（IA-2）-120KD阳性1人；ICA-40KD、GADA-65KD、ICA（IA-2）-120KD阳性1人。结论 血清GAD-Ab、ICA和IAA的联合检测对DM的分型预防β细胞功能衰竭、预防疗效及在高危人群中筛查I型糖尿病，指导临床用药以及判断预后具有重要的临床应用价值。
关键词: 糖尿病 谷氨酸脫羧酶抗体 胰岛细胞抗体 胰岛素自身抗体
糖尿病是一类使身体结构及功能改变，无法彻底治愈，需要长期治疗、护理及特殊康复训练的疾病。糖尿病的发生没有特异的原因，往往由多种危险因素共同作用引起，包括遗传、性别、年龄、婚姻、烟酒嗜好、肥胖、饮食习惯、职业、受教育程度、运动、经济收入、精神压力、气候等多种因素。糖尿病自身抗体印迹杂交检测有利于做好糖尿病的分型：1型和2型糖尿病的发病机理不同，治疗方法也存在着较大差异。自身抗体印迹杂交检测能够对糖尿病患者准确地分型诊断，在临床上具有重要意义；糖尿病的预防及预测：胰岛内β细胞的免疫性破坏是潜隐性过程，可在出现临床症状前多年即可存在，对无临床症状人群的糖尿病自身抗体联合检测，能够对糖尿病有很高的预测价值，同时可进行免疫干预，从而达到预防作用。
1材料和方法试剂 深圳市伯劳特生物制品有限公司生产的成套试剂盒。
1.1研究对象所有研究对象为2011年8月起在我院住院病人及门诊初诊的糖尿病患者。
1.2检测方法所有对象均空腹采血，分离血清，采用免疫印迹法检测免疫印迹技术）。Northern印迹技术是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维膜上的方法；糖尿病自身抗体免疫印迹试剂盒是采用Western印迹技术将胰岛细胞混合抗原（蛋白质）通过电泳将不同分子量的物质分离，再将其转印至硝酸纤维素膜上。我科自2011年8月起已监测244例患者之糖尿病自身抗体印迹杂交检测,通过得到的图谱和统计值,即获得每个患者糖尿病自身抗体印迹杂交检测的完整资料,其中包括ICA-120KD、GADA-65KD、ICA-64KD、ICA-40KD、IAA-5.8KD，以全面了解患者临床分型。
2 结果：
详见表1。
表1
结果显示有19人IAA-5.8KD为阳性，占所检测病人的2.16%，有14人ICA-40KD为阳性，占所检测病人的1.59%，有1人ICA-64KD阳性；有30人GADA-65KD为阳性，占所检测病人的3.4%，；有2人ICA（IA-2）-120KD为阳性；IAA-5.8KD、GADA-65KD阳性4人；ICA-40KD、GADA-65KD阳性2人；GADA-65KD、ICA（IA-2）-120KD阳性1人；ICA-40KD、GADA-65KD、ICA（IA-2）-120KD阳性1人。
附：糖尿病自身抗体免疫印迹标准带
3讨论：
胰岛素自身抗体（IAA），胰岛素为胰岛β细胞所分泌，分子量5.8KD，IAA在DM患儿中阳性率很高，并且是最早出现的自身抗体之一，其对Ⅰ型糖尿病诊断的敏感度40-70%，特异度99%；谷氨酸脱羧酶自身抗体（GADA）：谷氨酸脱羧酶在人类胰岛β细胞内含量丰富，分子量65KD，目前认为GADA的产生是由于机体感染柯萨奇病毒后，因病毒蛋白系列与GAD 的氨基酸系列相似而产生的交叉免疫反应所致。其中I-DM诊断的敏感度70-80%，特异度99%；胰岛细胞自身抗体（ICA）：ICA能早于Ⅰ型糖尿病的临床诊断8年而被检测出来，它可以作为疾病的一个早期指标或对疾病早期预测［1-2］。ICA是胰岛β细胞的胞浆抗体，是一种混合抗体。如果三种抗体联合检测可以显著提高1型DM早期诊断的敏感性和阳性预报率［3］。本试验检测三种抗体，其中有一项及一项以上的阳性率显著高于单独某一项抗体的阳性率。因此，联合检测三种胰岛自身抗体，提高了1型DM的诊断率，并有助于及早检出成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA），为采取有效的治疗措施提供依据。1993年Tuemi提出部分2型DM患者经口服降糖药治疗几年后失败，出现胰岛素缺乏，体内也出现针对胰岛β细胞的自身抗体，这一类患者被命名为成人隐匿性自身免疫性糖尿病(Latent autoimmune diabetes of adultsLADA)。这一类患者早期胰岛β细胞功能尚存，病情缓慢发展，胰岛β细胞功能逐步破坏，直至衰竭。有研究发现给予LADA患者小剂量胰岛素治疗可防止β细胞功能的进一步损害。如果早期使用胰岛素治疗，可以有效延缓控制此类情况发生。ICA、IAA、GAD-Ab在2型DM患者中的阳性率分别是10.6%、16.5%、12.7%，经过进一步诊断在2型DM患者中有部分患者为LADA。通过对胰岛自身抗体的检测，有助于LADA的预测，及早给予LADA患者小剂量胰岛素治疗，防止β细胞功能的进一步损害。将2型DM患者按年龄分组，各组中小于30岁组的胰岛自身抗体阳性率较高，所以在2型DM患者中特别是年轻患者加强胰岛自身抗体的检测，对预测及治疗亦具有重要的提示作用。
糖尿病自身抗体印迹杂交检测，可明确糖尿病的分型，我科自2011年8月起检测糖尿病测患者自身抗体印迹杂交检测以来,通过检测结果指导临床及时调整治疗方法，大大提高了患者达标率，缩短了患者的住院时间，提高了科室病床周转率。同时也为糖尿病的预防及预测起到了积极作用，根据检测数据及时可进行免疫干预，从而达到预防作用。总之，通过开展糖尿病自身抗体印迹杂交检测，全面了解患者临床分型、预测B细胞功能，针对性地制订干预策略,提高治疗效果,取得了较好的经济及社会效益。并无临床症状人群的糖尿病自身抗体联合检测，能够对糖尿病有很高的预测价值，同时可进行免疫干预，从而达到预防作用。
参考文献:
［1］ 王健民，周智广，伍汉文.谷氨酸脫羧酶自身抗体对胰岛素分泌的影响［J］.中华内分泌代谢杂志，2008.4（3）：168-171
［2］ 邢万架，张胜兰.1型DMHLA-DPBI DQBI基因与其自身抗体相关性研究［J］.中华内分泌代谢杂志，2001，17（6）：338-340
［3］ 王忠诚，曾祝伦，李泉.三种血清抗体联合检测1型糖尿病的预报价值［J］.中华检验医学杂志，2007，25（3）：223-225
关键词: 糖尿病 谷氨酸脫羧酶抗体 胰岛细胞抗体 胰岛素自身抗体
糖尿病是一类使身体结构及功能改变，无法彻底治愈，需要长期治疗、护理及特殊康复训练的疾病。糖尿病的发生没有特异的原因，往往由多种危险因素共同作用引起，包括遗传、性别、年龄、婚姻、烟酒嗜好、肥胖、饮食习惯、职业、受教育程度、运动、经济收入、精神压力、气候等多种因素。糖尿病自身抗体印迹杂交检测有利于做好糖尿病的分型：1型和2型糖尿病的发病机理不同，治疗方法也存在着较大差异。自身抗体印迹杂交检测能够对糖尿病患者准确地分型诊断，在临床上具有重要意义；糖尿病的预防及预测：胰岛内β细胞的免疫性破坏是潜隐性过程，可在出现临床症状前多年即可存在，对无临床症状人群的糖尿病自身抗体联合检测，能够对糖尿病有很高的预测价值，同时可进行免疫干预，从而达到预防作用。
1材料和方法试剂 深圳市伯劳特生物制品有限公司生产的成套试剂盒。
1.1研究对象所有研究对象为2011年8月起在我院住院病人及门诊初诊的糖尿病患者。
1.2检测方法所有对象均空腹采血，分离血清，采用免疫印迹法检测免疫印迹技术）。Northern印迹技术是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维膜上的方法；糖尿病自身抗体免疫印迹试剂盒是采用Western印迹技术将胰岛细胞混合抗原（蛋白质）通过电泳将不同分子量的物质分离，再将其转印至硝酸纤维素膜上。我科自2011年8月起已监测244例患者之糖尿病自身抗体印迹杂交检测,通过得到的图谱和统计值,即获得每个患者糖尿病自身抗体印迹杂交检测的完整资料,其中包括ICA-120KD、GADA-65KD、ICA-64KD、ICA-40KD、IAA-5.8KD，以全面了解患者临床分型。
2 结果：
详见表1。
表1
结果显示有19人IAA-5.8KD为阳性，占所检测病人的2.16%，有14人ICA-40KD为阳性，占所检测病人的1.59%，有1人ICA-64KD阳性；有30人GADA-65KD为阳性，占所检测病人的3.4%，；有2人ICA（IA-2）-120KD为阳性；IAA-5.8KD、GADA-65KD阳性4人；ICA-40KD、GADA-65KD阳性2人；GADA-65KD、ICA（IA-2）-120KD阳性1人；ICA-40KD、GADA-65KD、ICA（IA-2）-120KD阳性1人。
附：糖尿病自身抗体免疫印迹标准带
3讨论：
胰岛素自身抗体（IAA），胰岛素为胰岛β细胞所分泌，分子量5.8KD，IAA在DM患儿中阳性率很高，并且是最早出现的自身抗体之一，其对Ⅰ型糖尿病诊断的敏感度40-70%，特异度99%；谷氨酸脱羧酶自身抗体（GADA）：谷氨酸脱羧酶在人类胰岛β细胞内含量丰富，分子量65KD，目前认为GADA的产生是由于机体感染柯萨奇病毒后，因病毒蛋白系列与GAD 的氨基酸系列相似而产生的交叉免疫反应所致。其中I-DM诊断的敏感度70-80%，特异度99%；胰岛细胞自身抗体（ICA）：ICA能早于Ⅰ型糖尿病的临床诊断8年而被检测出来，它可以作为疾病的一个早期指标或对疾病早期预测［1-2］。ICA是胰岛β细胞的胞浆抗体，是一种混合抗体。如果三种抗体联合检测可以显著提高1型DM早期诊断的敏感性和阳性预报率［3］。本试验检测三种抗体，其中有一项及一项以上的阳性率显著高于单独某一项抗体的阳性率。因此，联合检测三种胰岛自身抗体，提高了1型DM的诊断率，并有助于及早检出成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA），为采取有效的治疗措施提供依据。1993年Tuemi提出部分2型DM患者经口服降糖药治疗几年后失败，出现胰岛素缺乏，体内也出现针对胰岛β细胞的自身抗体，这一类患者被命名为成人隐匿性自身免疫性糖尿病(Latent autoimmune diabetes of adultsLADA)。这一类患者早期胰岛β细胞功能尚存，病情缓慢发展，胰岛β细胞功能逐步破坏，直至衰竭。有研究发现给予LADA患者小剂量胰岛素治疗可防止β细胞功能的进一步损害。如果早期使用胰岛素治疗，可以有效延缓控制此类情况发生。ICA、IAA、GAD-Ab在2型DM患者中的阳性率分别是10.6%、16.5%、12.7%，经过进一步诊断在2型DM患者中有部分患者为LADA。通过对胰岛自身抗体的检测，有助于LADA的预测，及早给予LADA患者小剂量胰岛素治疗，防止β细胞功能的进一步损害。将2型DM患者按年龄分组，各组中小于30岁组的胰岛自身抗体阳性率较高，所以在2型DM患者中特别是年轻患者加强胰岛自身抗体的检测，对预测及治疗亦具有重要的提示作用。
糖尿病自身抗体印迹杂交检测，可明确糖尿病的分型，我科自2011年8月起检测糖尿病测患者自身抗体印迹杂交检测以来,通过检测结果指导临床及时调整治疗方法，大大提高了患者达标率，缩短了患者的住院时间，提高了科室病床周转率。同时也为糖尿病的预防及预测起到了积极作用，根据检测数据及时可进行免疫干预，从而达到预防作用。总之，通过开展糖尿病自身抗体印迹杂交检测，全面了解患者临床分型、预测B细胞功能，针对性地制订干预策略,提高治疗效果,取得了较好的经济及社会效益。并无临床症状人群的糖尿病自身抗体联合检测，能够对糖尿病有很高的预测价值，同时可进行免疫干预，从而达到预防作用。
参考文献:
［1］ 王健民，周智广，伍汉文.谷氨酸脫羧酶自身抗体对胰岛素分泌的影响［J］.中华内分泌代谢杂志，2008.4（3）：168-171
［2］ 邢万架，张胜兰.1型DMHLA-DPBI DQBI基因与其自身抗体相关性研究［J］.中华内分泌代谢杂志，2001，17（6）：338-340
［3］ 王忠诚，曾祝伦，李泉.三种血清抗体联合检测1型糖尿病的预报价值［J］.中华检验医学杂志，2007，25（3）：223-225