HPLC-荧光法测定醛糖还原酶的活性

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目的建立一种基于NADP+衍生物荧光的高灵敏度的体外测定醛糖还原酶(aldose reductase,AR)活性的HPLC方法。方法从大鼠的肾脏中分离纯化AR,以DL-甘油醛为底物,加入NADPH启动酶促反应。以C18柱分离NADP+衍生物,流动相为乙腈∶水(75∶25),流速1.0 ml.min-1,柱温25℃,荧光检测激发波长370 nm,发射波长465 nm。测定NADP+衍生物的稳定性以及NADPH、DL-甘油醛、pH、温度对AR活性的影响。结果 NADP+衍生物稳定性好,保留时间为(1.4
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