【摘 要】
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剪接因子Prp5是一种三磷酸腺苷(ATP)水解酶/RNA解旋酶,在内含子的识别和预剪接体的组装过程中具有重要的调控作用.分别克隆了酵母(Saccharomyces cerevisiae)与人(Homo sapie
【机 构】
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上海大学生命科学学院,上海,200000;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态学研究所,上海,200032;江苏科技大学生物技术学院,江苏镇江212018;中国农业科学院蚕业研究所,江苏镇江212
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剪接因子Prp5是一种三磷酸腺苷(ATP)水解酶/RNA解旋酶,在内含子的识别和预剪接体的组装过程中具有重要的调控作用.分别克隆了酵母(Saccharomyces cerevisiae)与人(Homo sapiens)Prp5蛋白的核心编码序列ScPrp5-M和hPrp5-M,然后在序列上游分别添加8×His标签序列,再与转基因质粒pBac-Seri 1-IE1 dsRed(含seri1基因启动子和信号肽序列)进行重组,得到pBac-ScPrp5-M和pBac-hPrp5-M转基因质粒.利用家蚕转基因技术将转基因质粒分别注射到蚕卵中,通过串联红色荧光标记筛选阳性转基因家蚕,在基因组水平检测到有ScPrp5-M和hPrp5-M插入的家蚕个体,进一步的RNA和蛋白质检测也证明2种外源蛋白在家蚕中部丝腺中特异性表达,并且在5龄第4天和第5天的表达量较高.此外,在家蚕中部丝腺表达的2种重组蛋白均能随丝蛋白分泌到体外存在于茧层中,经裂解和纯化后,每1g鲜茧茧层可分别获得6.25 μg重组ScPrp5-M蛋白和12.5 μg重组hPrp5-M蛋白.利用家蚕丝腺生物反应器表达外源Prp5蛋白,为进一步研究Prp5蛋白的功能奠定了一定的实验基础.
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