基于聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)中聚乙氧基团与硫氰酸钴铵生成可溶于有机溶剂的蓝色复合物的显色反应,建立一种适用于药用辅料吐温80快速、准确定量的比色测定方法,为中药注射剂质量控制提供可靠技术手段。在反应动力学研究基础上,对显色反应温度、时间和萃取有机溶剂等关键条件进行优化,并以中药注射剂苦木注射液为供试品进行系统的方法学验证和适用性考察。最终确定在试样溶液中加入3 m L硫氰酸钴铵溶液,于沸水浴中显色反应2 h,冷却至室温后精密加入二氯甲烷5 m L萃取显色产物,根据萃取溶液在623 nm波长处的吸光度计算试样中吐温80含量。在优化测定条件下,吐温80在0.8~3.0 mg与吸光度呈良好线性关系(y=0.258x-0.047,r=0.999 6,n=6),精密度RSD<2.0%,平均回收率为99.66%。该方法可快速、准确测定药物制剂中吐温80的含量,适用于中药注射剂的质量控制。