探讨原癌基因B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)对炎症微环境中人结直肠癌细胞HT-29细胞肿瘤迁移及上皮-间充质转化(EMT)的作用及机制。
方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法，检测Bmi-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的基因水平及Bmi-1蛋白水平，酶联免疫吸附剂测定法检测上清TNF-α和IL-6水平。噻唑蓝比色法和Transwell侵袭试验分别检测细胞增殖和侵袭能力，Western blot法检测EMT相关标记及核因子-κB (NF-κB)通路关键蛋白。
结果HT-29细胞经人急性单核细胞白血病细胞条件培养基(THP-1-CM)刺激后，Bmi-1、TNF-α和IL-6的基因表达均增高(1.86±0.08比1.00±0.05，2.38±0.13比1.00±0.14，3.00±0.15比1.00±0.05，P<0.01)，Bmi-1蛋白含量增高(1.68±0.08比1.00±0.05，P<0.01)，上清TNF-α和IL-6水平也有不同程度增加[(73±4) pg/ml比(32±4) pg/ml、(140±9) pg/ml比(42±9) pg/ml，P<0.01]。沉默Bmi-1基因后，HT-29细胞分泌TNF-α和IL-6的水平下降[(31±3)、(56±8) pg/ml]。THP-1-CM刺激后，细胞侵袭性增加，但对细胞增殖无影响。进一步检测发现，EMT相关标记E-钙黏素表达下调，波形蛋白和N-钙黏附素水平及NF-κB通路关键蛋白NF-κB p65的磷酸化上调。沉默Bmi-1基因后，减弱细胞侵袭，上皮细胞-间充质转化受抑制，NF-κB通路活化受抑制。
结论Bmi-1可能参与调控THP-1-CM诱导的HT-29细胞炎性因子的产生，并通过上皮细胞-间充质转化影响侵袭，与NF-κB通路活性有关。