【摘 要】
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目的构建靶向蛋白激酶CK2α的siRNA真核表达载体,探讨其对人喉癌细胞系HEp-2侵袭的抑制作用。方法采用基因重组技术,构建蛋白激酶CK2α靶向siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2,
【机 构】
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华中科技大学同济医学院协和医院耳鼻咽喉科
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目的构建靶向蛋白激酶CK2α的siRNA真核表达载体,探讨其对人喉癌细胞系HEp-2侵袭的抑制作用。方法采用基因重组技术,构建蛋白激酶CK2α靶向siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2,脂质体转染法转染HEp-2细胞。采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western Blot技术检测转染后HEp-2细胞蛋白激酶CK2αmRNA和蛋白表达,采用Boyden小室法检测转染后HEp-2细胞侵袭力的变化,采用免疫组织化学SP法检测转染后HEp-2细胞MMP2和TIMP2蛋白表达。结果成功构建蛋白激酶CK2α的siRNA真核表达载体psiRNA- hH1neo-CK2;与非特异转染组和空白组比较,转染psiRNA—hH1neo-CK2载体后,HEp-2细胞蛋白激酶CK2αmRNA和蛋白表达明显下降(P<0．01),HEp-2细胞侵袭力明显降低(P<0．01),MMP2／TIMP2比值明显增加(P<0．01)。结论蛋白激酶CK2α靶向siRNA表达载体可以抑制HEp-2细胞蛋白激酶CK2α的表达,抑制HEp-2细胞侵袭力。
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