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摘要
近年来，中药指纹图谱技术在中药炮制研究中也得到广泛的应用。通过查阅相关文献资料，介绍中药指纹图谱技术在产地加工及净制过程中的应用、在中药切制过程中的应用、在炮制辅料质量评价研究中的应用、在炮制工艺研究中的应用、在饮片不同炮制方法比较及质量控制研究中的应用。
关键词 指纹图谱技术；中药炮制；应用
中图分类号 S859.3 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）15-018-02
中药炮制是我国一项传统制药技术。饮片作为中医临床用药基本形式之一，其质量的优劣将直接影响中医临床疗效。中药指纹图谱分为中药化学成分指纹图谱和中药生物技指纹图谱两大类[1]，具有“整体性”与“模糊性”的特点。中药指纹图谱中潜藏着大量反映中药及其复方制剂内在化学物质信息的数据和变量，可对样品的整体轮廓进行较直观地观察，能较全面地反映所含成分的相对关系，还能较好地体现中药成分的复杂性和相关性。因此，能更好地鉴别炮制品种，评价、控制炮制品的质量，保证中医临床疗效，从而有利于中药的现代化和国际化。近年来，中药指纹图谱技术在中药炮制研究中也得到广泛的应用。
1 在产地加工及净制过程中的应用
中药炮制的净制是指在药材切制、炮炙或调配、制剂前，选取规定的药用部分，除去非药用部位、杂质及霉变品、虫蛀品、灰屑等，使其达到药用的纯度标准的方法。将中药指纹图谱的技术运用到药材的净制处理中，为饮片质量提供保证。王莉等[2]利用HPLC法建立了通过净制后湖北贝母的指纹图谱。该方法可以有效地控制湖北贝母饮片的质量以及对炮制工艺的评价，为进一步研究贝母炮制机理提供参考。仇立志[3]通过HPLC法建立不同产地怀牛膝饮片、最佳工艺硫磺熏蒸鲜牛膝饮片的指纹图谱，为硫磺熏蒸怀牛膝筛选最佳炮制工艺，并且为怀牛膝饮片的质量评价及安全使用提供依据。刘艳芳等[4]运用多指标定量结合指纹图谱分析方法对远志根皮、根及木心的化学成分进行分析。该研究为远志科学炮制加工方法的制定提供参考。
2 在中药切制过程中的应用
饮片切制是指将净选后的药物进行软化，切成一定规格的片、丝、块、段等炮制工艺。李友等[5]采用正交设计，以药材软化时加水量、润制时间和饮片切制厚度为考察因素，以水溶性浸出物为指标，并且采用HPLC指纹图谱技术对板蓝根粗粉和水润切制后的饮片进行比较，最终建立板蓝根软化切制的最佳工艺，建立了板蓝根药材醋酸乙酯萃取物HPLC指纹图谱。该研究证实在板蓝根切制前后指纹图谱对照谱图差异明顯，切制后中等极性部分损失较多。
3 在炮制辅料质量评价研究中应用
加入某些辅料进行炮制，可起到增强疗效、降低毒性等作用。辅料的质量将影响中药饮片的质量、临床疗效，那么可运用指纹图谱技术对其质量进行监控。张丽等[6]对生姜榨汁、生姜煮汁、干姜煮汁3种不同制法所得炮制辅料姜汁进行RPHPLC指纹图谱的比较研究。该方法较全面地反映不同制法的姜汁间的差异。
4 在炮制工艺研究中应用
在中药炮制工艺过程中，须讲究火候。利用指纹图谱技术，控制炮制工艺，大大提高饮片的炮制的质量，可为进一步的饮片炮制方法及原理研究提供科学依据。何晓燕等[7]用 HPLC 指纹图谱对槟榔炒制过程物质基础变化进行研究，为揭示槟榔炮制原理提供依据。张洪利等[8]通过正交试验设计，采用HPLC指纹图谱技术结合抑菌药效试验优选姜黄连饮片最佳工艺。刘艳菊等[9]采用X射线衍射法优选水飞朱砂炮制工艺，建立朱砂水飞炮制工艺质量控制的新方法。
5 在饮片不同炮制方法比较及质量控制研究中应用
5.1 薄层色谱指纹图谱
TCL指纹图谱多用于中药饮片各种成分的定性鉴别。徐腊英等[10]采用薄层鉴别方法研究苍术麸炒前后的化学成分变化。该方法可用于苍术药材的定性鉴别和辅料的研究。高晓霞等[11]运用薄层色谱指纹图谱方法，对10份不同采集地制何首乌样品进行研究。该方法可快速、有效地鉴别制何首乌，并且为评价其质量及品种整理提供新的证据。王彦青[12]采用薄层指纹图谱对延胡索的醋烘、醋煮、醋炙、酒炙的炮制品进行鉴别研究，为醋元胡临床用药的有效性奠定基础。
5.2 高效液相指纹图谱
HPLC具有分离效能高、分析速度快等优点。它在中药饮片炮制前后比较中有广泛运用。曹建军等[13]利用HPLC指纹图谱技术检测生地黄炮制成熟地黄过程中梓醇等主要活性成分及指纹的变化，确定熟地黄炮制终点。朱明贵等[14]采用 HPLC法建立生、醋五味子指纹图谱，为五味子饮片的质量评价标准提供科学依据。孔繁瑶等[15]对豨莶草生品及炮制一至九制品进行HPLC指纹图谱研究，为豨莶草炮制过程中化学成分变化规律和进一步阐明其疗效的改变奠定基础。耿媛媛等[16]采用 HPLC 法建立二神丸不同提取部位的指纹图谱，采用灰关联分析法建立其谱效关系，为二神丸的质量评价及其炮制机制奠定基础。
5.3 气相色谱指纹图谱
GC主要运用于含挥发性成分的中药饮片及其制剂中挥发油的鉴别与比较。在具体使用时，它常与质谱检测器（MS）联用。吴国清等[17]运用毛细管气相色谱法对薏苡仁生品及炮制品提取物进行分析，为薏苡仁生品及炮制品的质量控制提供有效手段。盛菲亚等[18]采用GCMS法，建立了香附生品、参照品和醋制品中挥发油的指纹图谱，为揭示香附醋制机制及其物质基础提供一定的科学依据。耿媛媛等[19]采用GCMS分析二神丸中补骨脂和肉豆蔻的炮制对其4种组合挥发性成分的影响。该研究证实补骨脂和肉豆蔻炮制后入药可降低毒性。王加等[20]利用GCMS联用技术鉴别生川乌和制川乌挥发性成分，为川乌的进一步研究提供科学依据。
5.4 高效毛细管电泳指纹图谱
目前，高效毛细管电泳指纹图谱主要运用于中药炮制品成分分析与比较研究。施婧妮等[21]利用毛细管区带电泳法，建立了10 批生鳖甲与醋鳖甲有效物质部位的指纹图谱，并且进行对比研究。结果显示，鳖甲炮制前后化学成分发生“质”与“量”的变化。胡莹[22]采用高效毛细管电泳法测定金樱子及其炮制品的指纹图谱。该结果可作为金樱子饮片质量的评价依据。张英等[23]运用高效毛细管电泳法对杜仲炮制前后绿原酸的含量进行分析。该研究为杜仲炮制具有重要意义提供依据。 5.5 红外光谱指纹图谱
红外光谱指纹图谱技术在饮片炮制前后比较及其制剂中应用较多。吴明侠等[24]采用傅里叶变换红外光谱技术对野菊花不同炮制品进行研究，获得二者的红外谱、二阶导数谱和二维相关红外谱。尤淑霞等[25]分别测定白矾与其炮制品枯矾的红外光谱图谱，为白矾与枯矾的鉴别提供红外光谱的鉴别指标。李可藏等[26]比较了山茱萸炮制前后红外光谱图差异，为山茱萸生品、酒制品鉴别提供新的方法。毕晓黎等[27]对补骨脂与盐补骨脂配方颗粒红外光谱特征进行研究。该方法快速、准确地鉴别补骨脂与盐补骨脂配方颗粒。
5.6 紫外光谱指纹图谱
紫外光谱可分为导数光谱及紫外谱线组法两种，可用于中药炮制品的质量监控。翁德会等[28]采用紫外谱线组法，对厚朴饮片和姜厚朴饮片4种不同极性提取液进行紫外扫描，并且应用UV测定厚朴中酚性成分的含量，为厚朴的研究和质量监控提供参考。郑玉丽[29]采用紫外分光光度法，比较生乳香、清炒乳香、醋炙乳香中三萜类有机酸含量，其中以醋炙品乳香三萜类有机酸含量最高。
5.7 X射线衍射Fourier指纹图谱
许腊英[30]等运用X射线衍射Fourier指纹图谱法对乌梅以及乌梅轻炭、乌梅标炭、乌梅重炭粉末进行分析，结果表明乌梅、乌梅炭粉末XRD图谱重现性好，均具指纹特征，可作为鉴别指标。雷雨等[31]采用X射线衍射指纹图谱分析方法，分析不同产地、批次的自然铜生煅品X射线衍射指纹图谱。该方法从整体上显示生煅品的特征，为自然铜生煅品的质量控制提供有效手段。
5.8 中药生物技术指纹图谱
中药生物指纹图谱又叫DNA指纹图谱。这种技术主要有 DNA片段分析技术（RFLP）、任意引物聚合酶链式反应（APPCR）、随机扩增多态性（RAPD）、多聚酶链反应（PCR）等。目前，该项技术在炮制研究也有一定的应用。许腊英等[32]对不同产地的茅苍术炮制前后进行 DNA指纹图谱研究，结果表明不同产地的茅苍术生品 DNA指纹图谱一致，几种麸炒苍术的 DNA指纹图谱与生品有较大差异。该方法可用于鉴别同种药材的生品。许腊英等[33]采用RAPD技术对不同产地乌梅、乌梅炭进行研究，结果表明不同产地的乌梅生品 DNA 指纹图谱一致；经炮制后的乌梅炭 DNA 指纹图谱与生品有较大的差异。该研究RAPD 技术可作为乌梅生品道地品种的鉴定的参考方法。
6 结语
中药指纹图谱的建立能全面反映中药的整体化学、生物学特征，体现其内在的整体质量。该项技术在中药炮制研究中的发展与应用，不仅能够客观地评价炮制过程对药物的影响，而且能进一步提高中药饮片标准化程度，从而更好地控制炮制品的质量，保证和提高临床疗效。这必将在今后实现中药现代化及中医药走向世界过程中发挥重要的作用。
参考文献
[1]
周玉新.中药指纹图谱研究技术[M].北京：化学工业出版社，2002：3.
[2] 王莉，许腊英，陈智国，等.净制湖北贝母指纹图谱研究[J].湖北中医学院学报，2010，12（4）：27-29.
[3] 仇立志.硫磺熏蒸对怀牛膝饮片质量的相关性评价[D].济南：山东中医药大学，2012.
[4] 刘艳芳，彭东艳，杨晓娟，等.去心与不去心远志药材的化学成分和药效学比较研究[J].中国药学杂志，2012，47（24）：1975-1979.
[5] 李友，马莉，龚慕辛，等.板蓝根切制工艺的优选及切制前后指纹图谱的变化研究[J].中国中药杂志，2009，34（19）：2177-2180.
[6] 张丽，王智民，王维皓，等.作炮制辅料用姜汁的HPLC指纹图谱比较[J].中国中药杂志，2008（9）：1010-1013.
[7] 何晓燕，刘玉杰，黄永亮，等.槟榔炒制过程中不同炮制品的指纹图谱分析[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（17）：44-46.
[8] 张洪利，康大力，黄艳萍，等.多指标正交试验优化姜黄连炮制工艺[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（9）：14-16，18.
[9] 刘艳菊，许康，潘新，等.X射线衍射法优选水飞朱砂炮制工艺[J].时珍国医国药，2012，23（1）：184-185.
[10] 许腊英，陈绍文，毛翼，等.苍术炮制品及其辅料麦麸的薄层鉴别研究[J].湖北中医学院学报，2006（3）：17-18.
[11] 高晓霞，严寒静，梁从庆.不同采集地制何首乌薄层色谱指纹图谱研究[J].中国实验方剂学杂志，2007，13（5）：4-7.
[12] 王彦青.延胡索不同炮制方法的薄层色谱鉴别对比研究[J].中国医药指南，2014，12（11）：50-51.
[13] 曹建军，梁宗锁，杨东风，等.应用HPLC指纹图谱技术确定熟地黄炮制终点[J].中国中药杂志，2010，35（19）：2556-2560.
[14] 朱明贵，李丽，肖永庆，等.五味子醋制前后指纹图谱的分析比较[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（21）：100-104.
[15] 孔繁瑶，胡慧华，田志浩，等.炮制前后豨莶草指标性成分及指纹图谱研究[J].中国中药杂志，2014，39（15）：2907-2911.
[16] 耿媛媛，胡昌江，潘新，等.二神丸不同提取部位温脾止泻的谱效关系研究[J].中草药，2014，45（18）：2658-2663.
[17] 吴国清，曹岗，夏云华.中药薏苡仁炮制前后 GC 指纹图谱研究[J].中华中医药学刊，2013，31（7）：1495-1498.
[18] 盛菲亚，卢君蓉，彭伟，等.香附炮制前后挥发油的GCMS 指纹图谱对比研究[J].中草药，2013，44（23）：3321-3327.
[19] 耿媛媛，胡昌江，潘新，等.GC-MS 分析炮制对二神丸中挥发性成分的影响[J].中成药，2014，36（10）：2148-2151.
近年来，中药指纹图谱技术在中药炮制研究中也得到广泛的应用。通过查阅相关文献资料，介绍中药指纹图谱技术在产地加工及净制过程中的应用、在中药切制过程中的应用、在炮制辅料质量评价研究中的应用、在炮制工艺研究中的应用、在饮片不同炮制方法比较及质量控制研究中的应用。
关键词 指纹图谱技术；中药炮制；应用
中图分类号 S859.3 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）15-018-02
中药炮制是我国一项传统制药技术。饮片作为中医临床用药基本形式之一，其质量的优劣将直接影响中医临床疗效。中药指纹图谱分为中药化学成分指纹图谱和中药生物技指纹图谱两大类[1]，具有“整体性”与“模糊性”的特点。中药指纹图谱中潜藏着大量反映中药及其复方制剂内在化学物质信息的数据和变量，可对样品的整体轮廓进行较直观地观察，能较全面地反映所含成分的相对关系，还能较好地体现中药成分的复杂性和相关性。因此，能更好地鉴别炮制品种，评价、控制炮制品的质量，保证中医临床疗效，从而有利于中药的现代化和国际化。近年来，中药指纹图谱技术在中药炮制研究中也得到广泛的应用。
1 在产地加工及净制过程中的应用
中药炮制的净制是指在药材切制、炮炙或调配、制剂前，选取规定的药用部分，除去非药用部位、杂质及霉变品、虫蛀品、灰屑等，使其达到药用的纯度标准的方法。将中药指纹图谱的技术运用到药材的净制处理中，为饮片质量提供保证。王莉等[2]利用HPLC法建立了通过净制后湖北贝母的指纹图谱。该方法可以有效地控制湖北贝母饮片的质量以及对炮制工艺的评价，为进一步研究贝母炮制机理提供参考。仇立志[3]通过HPLC法建立不同产地怀牛膝饮片、最佳工艺硫磺熏蒸鲜牛膝饮片的指纹图谱，为硫磺熏蒸怀牛膝筛选最佳炮制工艺，并且为怀牛膝饮片的质量评价及安全使用提供依据。刘艳芳等[4]运用多指标定量结合指纹图谱分析方法对远志根皮、根及木心的化学成分进行分析。该研究为远志科学炮制加工方法的制定提供参考。
2 在中药切制过程中的应用
饮片切制是指将净选后的药物进行软化，切成一定规格的片、丝、块、段等炮制工艺。李友等[5]采用正交设计，以药材软化时加水量、润制时间和饮片切制厚度为考察因素，以水溶性浸出物为指标，并且采用HPLC指纹图谱技术对板蓝根粗粉和水润切制后的饮片进行比较，最终建立板蓝根软化切制的最佳工艺，建立了板蓝根药材醋酸乙酯萃取物HPLC指纹图谱。该研究证实在板蓝根切制前后指纹图谱对照谱图差异明顯，切制后中等极性部分损失较多。
3 在炮制辅料质量评价研究中应用
加入某些辅料进行炮制，可起到增强疗效、降低毒性等作用。辅料的质量将影响中药饮片的质量、临床疗效，那么可运用指纹图谱技术对其质量进行监控。张丽等[6]对生姜榨汁、生姜煮汁、干姜煮汁3种不同制法所得炮制辅料姜汁进行RPHPLC指纹图谱的比较研究。该方法较全面地反映不同制法的姜汁间的差异。
4 在炮制工艺研究中应用
在中药炮制工艺过程中，须讲究火候。利用指纹图谱技术，控制炮制工艺，大大提高饮片的炮制的质量，可为进一步的饮片炮制方法及原理研究提供科学依据。何晓燕等[7]用 HPLC 指纹图谱对槟榔炒制过程物质基础变化进行研究，为揭示槟榔炮制原理提供依据。张洪利等[8]通过正交试验设计，采用HPLC指纹图谱技术结合抑菌药效试验优选姜黄连饮片最佳工艺。刘艳菊等[9]采用X射线衍射法优选水飞朱砂炮制工艺，建立朱砂水飞炮制工艺质量控制的新方法。
5 在饮片不同炮制方法比较及质量控制研究中应用
5.1 薄层色谱指纹图谱
TCL指纹图谱多用于中药饮片各种成分的定性鉴别。徐腊英等[10]采用薄层鉴别方法研究苍术麸炒前后的化学成分变化。该方法可用于苍术药材的定性鉴别和辅料的研究。高晓霞等[11]运用薄层色谱指纹图谱方法，对10份不同采集地制何首乌样品进行研究。该方法可快速、有效地鉴别制何首乌，并且为评价其质量及品种整理提供新的证据。王彦青[12]采用薄层指纹图谱对延胡索的醋烘、醋煮、醋炙、酒炙的炮制品进行鉴别研究，为醋元胡临床用药的有效性奠定基础。
5.2 高效液相指纹图谱
HPLC具有分离效能高、分析速度快等优点。它在中药饮片炮制前后比较中有广泛运用。曹建军等[13]利用HPLC指纹图谱技术检测生地黄炮制成熟地黄过程中梓醇等主要活性成分及指纹的变化，确定熟地黄炮制终点。朱明贵等[14]采用 HPLC法建立生、醋五味子指纹图谱，为五味子饮片的质量评价标准提供科学依据。孔繁瑶等[15]对豨莶草生品及炮制一至九制品进行HPLC指纹图谱研究，为豨莶草炮制过程中化学成分变化规律和进一步阐明其疗效的改变奠定基础。耿媛媛等[16]采用 HPLC 法建立二神丸不同提取部位的指纹图谱，采用灰关联分析法建立其谱效关系，为二神丸的质量评价及其炮制机制奠定基础。
5.3 气相色谱指纹图谱
GC主要运用于含挥发性成分的中药饮片及其制剂中挥发油的鉴别与比较。在具体使用时，它常与质谱检测器（MS）联用。吴国清等[17]运用毛细管气相色谱法对薏苡仁生品及炮制品提取物进行分析，为薏苡仁生品及炮制品的质量控制提供有效手段。盛菲亚等[18]采用GCMS法，建立了香附生品、参照品和醋制品中挥发油的指纹图谱，为揭示香附醋制机制及其物质基础提供一定的科学依据。耿媛媛等[19]采用GCMS分析二神丸中补骨脂和肉豆蔻的炮制对其4种组合挥发性成分的影响。该研究证实补骨脂和肉豆蔻炮制后入药可降低毒性。王加等[20]利用GCMS联用技术鉴别生川乌和制川乌挥发性成分，为川乌的进一步研究提供科学依据。
5.4 高效毛细管电泳指纹图谱
目前，高效毛细管电泳指纹图谱主要运用于中药炮制品成分分析与比较研究。施婧妮等[21]利用毛细管区带电泳法，建立了10 批生鳖甲与醋鳖甲有效物质部位的指纹图谱，并且进行对比研究。结果显示，鳖甲炮制前后化学成分发生“质”与“量”的变化。胡莹[22]采用高效毛细管电泳法测定金樱子及其炮制品的指纹图谱。该结果可作为金樱子饮片质量的评价依据。张英等[23]运用高效毛细管电泳法对杜仲炮制前后绿原酸的含量进行分析。该研究为杜仲炮制具有重要意义提供依据。 5.5 红外光谱指纹图谱
红外光谱指纹图谱技术在饮片炮制前后比较及其制剂中应用较多。吴明侠等[24]采用傅里叶变换红外光谱技术对野菊花不同炮制品进行研究，获得二者的红外谱、二阶导数谱和二维相关红外谱。尤淑霞等[25]分别测定白矾与其炮制品枯矾的红外光谱图谱，为白矾与枯矾的鉴别提供红外光谱的鉴别指标。李可藏等[26]比较了山茱萸炮制前后红外光谱图差异，为山茱萸生品、酒制品鉴别提供新的方法。毕晓黎等[27]对补骨脂与盐补骨脂配方颗粒红外光谱特征进行研究。该方法快速、准确地鉴别补骨脂与盐补骨脂配方颗粒。
5.6 紫外光谱指纹图谱
紫外光谱可分为导数光谱及紫外谱线组法两种，可用于中药炮制品的质量监控。翁德会等[28]采用紫外谱线组法，对厚朴饮片和姜厚朴饮片4种不同极性提取液进行紫外扫描，并且应用UV测定厚朴中酚性成分的含量，为厚朴的研究和质量监控提供参考。郑玉丽[29]采用紫外分光光度法，比较生乳香、清炒乳香、醋炙乳香中三萜类有机酸含量，其中以醋炙品乳香三萜类有机酸含量最高。
5.7 X射线衍射Fourier指纹图谱
许腊英[30]等运用X射线衍射Fourier指纹图谱法对乌梅以及乌梅轻炭、乌梅标炭、乌梅重炭粉末进行分析，结果表明乌梅、乌梅炭粉末XRD图谱重现性好，均具指纹特征，可作为鉴别指标。雷雨等[31]采用X射线衍射指纹图谱分析方法，分析不同产地、批次的自然铜生煅品X射线衍射指纹图谱。该方法从整体上显示生煅品的特征，为自然铜生煅品的质量控制提供有效手段。
5.8 中药生物技术指纹图谱
中药生物指纹图谱又叫DNA指纹图谱。这种技术主要有 DNA片段分析技术（RFLP）、任意引物聚合酶链式反应（APPCR）、随机扩增多态性（RAPD）、多聚酶链反应（PCR）等。目前，该项技术在炮制研究也有一定的应用。许腊英等[32]对不同产地的茅苍术炮制前后进行 DNA指纹图谱研究，结果表明不同产地的茅苍术生品 DNA指纹图谱一致，几种麸炒苍术的 DNA指纹图谱与生品有较大差异。该方法可用于鉴别同种药材的生品。许腊英等[33]采用RAPD技术对不同产地乌梅、乌梅炭进行研究，结果表明不同产地的乌梅生品 DNA 指纹图谱一致；经炮制后的乌梅炭 DNA 指纹图谱与生品有较大的差异。该研究RAPD 技术可作为乌梅生品道地品种的鉴定的参考方法。
6 结语
中药指纹图谱的建立能全面反映中药的整体化学、生物学特征，体现其内在的整体质量。该项技术在中药炮制研究中的发展与应用，不仅能够客观地评价炮制过程对药物的影响，而且能进一步提高中药饮片标准化程度，从而更好地控制炮制品的质量，保证和提高临床疗效。这必将在今后实现中药现代化及中医药走向世界过程中发挥重要的作用。
参考文献
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[9] 刘艳菊，许康，潘新，等.X射线衍射法优选水飞朱砂炮制工艺[J].时珍国医国药，2012，23（1）：184-185.
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