【摘 要】
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[目的]构建点突变的GLP-1Gly8,并与人血清白蛋白(HSA)结构域Ⅰ融合,延长GLP-1的半衰期。[方法]采用常规PCR扩增白蛋白结构域Ⅰ片段,利用SOE-PCR扩GLP-1Gly8基因并将两个基因拼接,得到的HSA-GLP-1Gly8融合基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到pET30a表达载体,重组质粒pET30a-HSA-GLP-1Gly8转入E.co
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[目的]构建点突变的GLP-1Gly8,并与人血清白蛋白(HSA)结构域Ⅰ融合,延长GLP-1的半衰期。[方法]采用常规PCR扩增白蛋白结构域Ⅰ片段,利用SOE-PCR扩GLP-1Gly8基因并将两个基因拼接,得到的HSA-GLP-1Gly8融合基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到pET30a表达载体,重组质粒pET30a-HSA-GLP-1Gly8转入E.coliBL21(DE3)宿主菌中进行IPTG诱导表达。[结果]PCR扩增分别获得140bp的GLP-1Gly8基因499bp的HSA的片段及经融合后的HSA-GLP-1Gly8基因。表达载体pET30a-HSA-GLP-1Gly8在E.coliBL21(DE3)宿主菌中经IPTG诱导,过表达了分子量约为22kDa的融合蛋白。[结论]成功构建了pET30a-HSA-GLP-1Gly8原核表达载体,融合蛋白在BL21(DE3)菌中以包涵体的形式过表达。
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