【摘 要】
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目的 研究肿瘤抑制基因PTEN对HepG 2细胞凋亡及p53蛋白表达的影响,并探讨相关机制.方法将携带有野生型PTEN基因及突变型G129E-PTEN,C124A-PTEN基因的真核表达载体转染HepG2细胞,利用western印迹杂交检测PTEN表达、蛋白激酶B(PKR/Akt)和焦点粘附激酶(FAK)的磷酸化状态,以及野生型p53蛋白表达水平的变化;并应用流式细胞仪、激光共聚焦技术检测细胞周期
【机 构】
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430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,430030,
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目的 研究肿瘤抑制基因PTEN对HepG 2细胞凋亡及p53蛋白表达的影响,并探讨相关机制.方法将携带有野生型PTEN基因及突变型G129E-PTEN,C124A-PTEN基因的真核表达载体转染HepG2细胞,利用western印迹杂交检测PTEN表达、蛋白激酶B(PKR/Akt)和焦点粘附激酶(FAK)的磷酸化状态,以及野生型p53蛋白表达水平的变化;并应用流式细胞仪、激光共聚焦技术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果与对照细胞相比,转染野生型PTEN和G129E-PTEN的HepG2细胞中磷酸化FAK(-65%,-65%)与磷酸化Akt(-93%,-35%)表达均存在不同程度的下调,而细胞凋亡率分别增加至19.8%± 1.2%和9.2%± 0.6%,并且p5 3蛋白表达上调(+120%,+50%);然而转染C124A-PTEN的细胞中各项检测指标均无明显变化.结论 PTEN依赖其蛋白磷酸酶活性抑制FAK的磷酸化:并主要通过脂质磷酸酶活性抑制Akt的磷酸化,并诱导HepG2细胞凋亡和p53蛋白表达上调。
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