人细胞周期相关激酶启动子的克隆和初步分析

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克隆人的细胞周期相关激酶(CCRK)基因启动子,分析与其表达有关的转录调控因子.通过巢式PCR方法,从人的基因组总DNA中分离出CCRK基因5′端非翻译区大小为1 072 bp的片段.这段片段的3′端起始点在第一个外显子里第一个翻译密码子ATG(+1)上游128 bp处.以1 072 bp为模板,对启动子进行5′端删除分析,分别扩增951 bp(-1072/-128)、564 bp(-692/-128)、313 bp(-441/-128)、127 bp(-239/-128)的片段,与pGL3-Basic荧光素酶报告载体重组构建,人工加上克隆位点,5′端带有KpnI、3′端带有Xhol位点.瞬时转染恶性神经胶质瘤细胞株U373,通过双荧光素酶活性进行分析.对分离出的1072 bp的片段进行测序,结果与GennBank(Accession AF035013)的序列比较,同源序列达到98%.双荧光素酶活性分析564 bp片段有最强的活性,313 bp片段为有活性的最小片段.本研究为进一步研究分析CCRK的核心启动子和与其相关的转录因子奠定基础.
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