【摘 要】
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目的 探索肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1蛋白作为抗原成分在临床血清抗体检测中的应用.方法 通过生物信息学分析P1基因主要抗原决定簇,选择其分值较高的部位进行原
【机 构】
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首都儿科研究所细菌研究室,首都儿科研究所附属儿童医院检验科
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目的 探索肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1蛋白作为抗原成分在临床血清抗体检测中的应用.方法 通过生物信息学分析P1基因主要抗原决定簇,选择其分值较高的部位进行原核表达、纯化,并进行Western blot鉴定,用纯化后的蛋白免疫小鼠,评价其免疫原性,同时用其作为抗原,采用ELISA方法检测肺炎支原体患儿血清抗体并与全菌体抗原进行比较.结果 成功构建了pET-28C-P1-534原核表达载体,经表达、纯化后获得了相对分子质量为26×103的融合蛋白;Western blot检测其能与Mp阳性血清发生特异性反应;利用纯化的重组蛋白免疫小鼠,能诱导小鼠产生特异性免疫应答,抗体滴度可达 1∶2000;用此蛋白作为抗原成分检测患儿血清,其敏感性和特异性分别为85.00%及97.67%.结论 重组表达的P1-534蛋白具有良好的免疫原性,作为新的抗原成分其敏感性和特异性优于全菌体抗原,为肺炎支原体抗原成分及其蛋白保护作用的研究奠定了基础.
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