【摘 要】
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为了构建高效的CRISPR/Cas12a介导的水稻基因编辑系统,通过测试不同来源的Cas12a蛋白、crRNA长度和构型来探索影响Cas12a编辑活性的因素发现,相对于AsCas12a和LbCas12a在crRN
【机 构】
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中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;浙江大学农业与生物技术学院,杭州310058
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为了构建高效的CRISPR/Cas12a介导的水稻基因编辑系统,通过测试不同来源的Cas12a蛋白、crRNA长度和构型来探索影响Cas12a编辑活性的因素发现,相对于AsCas12a和LbCas12a在crRNA为23 nt时具有更高的编辑效率,并且crRNA 3'端的U4AU4结构并不能增强其在水稻中的编辑活性,同时利用大肠杆菌腺嘌吟脱氨酶变体TadA8e开发了 CRISPR/LbCas12a介导的腺嘌吟碱基编辑系统pUbi:rBE58,成功地将水稻内源基因OsCPK15实现A到G替换(A＞G),其效率为33.33％.本研究证明了利用CRISPR/Cas12a可以对水稻基因组进行编辑,丰富了水稻基因编辑工具,拓宽了基因编辑工具箱.
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