【摘 要】
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目的 X射线交叉互补修复基因1 (XRCC1)参与精子发生过程以及调控精子机制.方法 本研究运用cre-loxp条件性基因打靶,DNA琼脂糖凝胶电泳,原位杂交,免疫组化,免疫印迹,Tunnel凋亡实验,实时荧光定量PCR和基因芯片信息学等多种分子生物学方法,利用小鼠模型探讨XRCC1在精子发生过程中的作用及其分子机制.结果 首先我们通过原位杂交和免疫印迹实验验证了该条件性敲除小鼠模型的成功构建.我
【机 构】
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南京医科大学毒理研究所“现代毒理学”教育部重点实验室,江苏南京210029
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目的 X射线交叉互补修复基因1 (XRCC1)参与精子发生过程以及调控精子机制.方法 本研究运用cre-loxp条件性基因打靶,DNA琼脂糖凝胶电泳,原位杂交,免疫组化,免疫印迹,Tunnel凋亡实验,实时荧光定量PCR和基因芯片信息学等多种分子生物学方法,利用小鼠模型探讨XRCC1在精子发生过程中的作用及其分子机制.结果 首先我们通过原位杂交和免疫印迹实验验证了该条件性敲除小鼠模型的成功构建.我们初步证实了：①XRCC1在精子发生过程中起一定的作用.处理组的小鼠睾丸外观大小和重量明显小于对照组,并且处理组的产仔率也显著低于对照组.②HE染色切片观察到处理组的部分睾丸曲细精管有明显缺失,附睾中精子数目也显著小于对照组.③Tunnel结果发现处理组睾丸石蜡切片有明显凋亡迹象,这可能是未能对减数分裂时DNA损伤进行及时修复,从而诱发凋亡途径.④为进一步研究为何XRCC1的缺失能导致上述结果,我们后续利用实时荧光定量PCR发现处理组睾丸组织线粒体基因组在转录水平上有改变.由于已有研究报道XRCC1本身作为脚手架蛋白,并没有酶催化活性以及XRCC1并不直接参与线粒体基因组损伤的修复.结论 Xrcc1的缺失显著影响精子发生过程.提示XRCC1参与了精子发生这个过程,并间接的通过保护线粒体基因组的稳定性和完整性,从而保证精子发生过程的正常.
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