【摘 要】
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目的 验证人细胞内微小RNA hsa-miR-1224-3p是否抑制HIV-1的复制.方法 我们以HIV-1 YU-2毒株全长转录本末端1.9 kb长度的3-UTR区域为研究模型,通过miRNA报告基因实验发现对应于Nef蛋白编码区前半部分约350 nt的区域可能有细胞内miRNA结合而抑制HIV-1的基因表达,对这一片段进行miRNA结合的生物信息学分析后发现其上有两个可能的hsa-miR-12
【机 构】
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浙江大学医学院附属第一医院传染科 310003
【出 处】
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中华医学会第六次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议
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目的 验证人细胞内微小RNA hsa-miR-1224-3p是否抑制HIV-1的复制.方法 我们以HIV-1 YU-2毒株全长转录本末端1.9 kb长度的3-UTR区域为研究模型,通过miRNA报告基因实验发现对应于Nef蛋白编码区前半部分约350 nt的区域可能有细胞内miRNA结合而抑制HIV-1的基因表达,对这一片段进行miRNA结合的生物信息学分析后发现其上有两个可能的hsa-miR-1224-3p的结合位点,我们进一步以miRNA stem-loop RT-PCR方法检测hsa-miR-1224-3p在几种人细胞内的表达情况,以及通过miRNA结合位点突变报告基因实验,外源过表达和miRNA反义抑制物的方法验证hsa-miR-1224-3p对HIV-1复制的抑制作用.结果 经miRNA stem-loop RT-PCR检测发现在293T,Jurkat,以及外周血单个核细胞中均有低水平的hsa-miR-1224-3p表达.在293T和Jurkat细胞中,突变两个hsa-miR-1224-3p的结合位点后,报告基因表达上调,提示hsa-miR-1224-3p通过两个预测的位点发挥作用.在293T细胞中,通过shRNA方法过表达hsa-miR-1224-3p显著降低共转染HIV-1假病毒质粒AE-GFP的p24产量,而以反义miRNA技术干扰hsa-miR-1224-3p的功能后,转染假病毒质粒AE-GFP的p24产量升高.结论 hsa-miR-1224-3p在几种人细胞中有低水平表达,并通过作用于HIV-1转录本上的两个位点抑制HIV-1的复制.
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