【摘 要】
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为进一步研究鸵鸟的防御素基因的功能和生物学活性。参照克隆得到的鸵鸟防御素cDNA片段,通过选用大肠杆菌偏好密码子对鸵鸟防御素基因进行改造,人工合成鸵鸟防御素基因,将成熟肽序列重组到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX-4T-1-Defensin,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,从而采用在大肠杆菌中表达外源蛋白的方法,进行了鸵鸟防御素原核表达的研究。结果表明重组蛋白经变性复
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002 河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002
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为进一步研究鸵鸟的防御素基因的功能和生物学活性。参照克隆得到的鸵鸟防御素cDNA片段,通过选用大肠杆菌偏好密码子对鸵鸟防御素基因进行改造,人工合成鸵鸟防御素基因,将成熟肽序列重组到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX-4T-1-Defensin,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,从而采用在大肠杆菌中表达外源蛋白的方法,进行了鸵鸟防御素原核表达的研究。结果表明重组蛋白经变性复性后无抑菌活性,可能是由于在其N-端或C-端融合的蛋白太大对其造成的影响,或者与所用载体、表达条件、蛋白纯化方案等不适合有关,有待于进一步探讨。
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本研究使用氯化铵裂解、超声波破碎、醋酸提取、CM-SepharoseF F弱酸性阳离子交换层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法,从鸵鸟白细胞中分离纯化出了抗茵肽,使用微量琼脂糖弥散法进行了抗茵活性与最小抑茵浓度(MIC)的测定,应用二级质谱(MS/MS)对抗茵肽的分子量和氨基酸序列进行了测定。结果表明:在鸵鸟白细胞中存在抗茵肽,其对金黄色葡萄球茵S aureus 1056MRSA、鸡大肠
本试验采用浓盐酸腐蚀法对种蛋进行开窗处理,研究该方法对第五天鸡胚存活率的影响。对入孵三天的种蛋进行赤道面开窗处理,然后采用蛋壳膜石蜡封口。结果表明,浓盐酸在腐蚀蛋壳以后不能继续腐蚀蛋壳膜,且采用该方法能有效降低机械开窗法对鸡胚的影响,提高孵化第五天鸡胚的成活率,试验组成活率迭77.27%;与机械开窗组的成活率差异极显著(X=80.32>X0.95)。
本文采用PCR-RFLP技术检测了文昌鸡GHR基因内含子2、内含子5位点的多态性,并采用SPSS程序分析了GHR基因内含子2、内含子5位点对文昌鸡繁殖性能的影响。结果表明:经限制性内切酶HindⅢ、NspI分别对GHR基因内含子2、内含予5酶切后均出现了两种带型。GHR基因内含子2等位基因C、C频率分别为0.06和0.94,GHR基因内含子5等位基因D和D基因频率分别为0.19和0.81。两位点均
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