【摘 要】
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许多单股正链RNA病毒的基因组末端含有一段poly(A)尾,这对病毒基因组RNA的感染性起着非常重要的作用。本研究以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,通过突变PCR获得poly(A)尾长度分别为0、5、8、9、10、22、35的全长突变体克隆,经体外转录转染MARC-145细胞,观察细胞病变(CPE),对于能产生CPE的,抽提细胞上清中的病毒RNA,通
【机 构】
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中国农业科学院上海善医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心,动物传染病研究室,农业部动物寄生虫病重点实验室,上海,200232;南京农业大学动物医学院,江苏南京,210095
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
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许多单股正链RNA病毒的基因组末端含有一段poly(A)尾,这对病毒基因组RNA的感染性起着非常重要的作用。本研究以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,通过突变PCR获得poly(A)尾长度分别为0、5、8、9、10、22、35的全长突变体克隆,经体外转录转染MARC-145细胞,观察细胞病变(CPE),对于能产生CPE的,抽提细胞上清中的病毒RNA,通过G-Tailing法鉴定子代病毒基因组的poly(A)尾长度。结果表明:1.poly(A)尾影响PRRSV基因组的感染性,且最小长度为10；2.PRRSV基因组poly(A)尾在感染细胞过程中能被修复。
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通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了PRRSV GP5,GP6基因并进行了克隆与鉴定。构建了含GP5基因的真核表达载体pcDNA-GP5,pcDNA-GP5/6,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111瞬时共转染人胚肾细293T,48h后收集假病毒上清,将假病毒上清超速离心后用抗PRRSV的多抗通过Western-blot证明GP5蛋白能够在假
本文通过对RT-PCR方法扩增到的广东地区12个毒株的ORF5基因进行限制性片断长度多态性(RFLP)分析,利用Mlu Ⅰ、SacⅡ、HaeⅢ、MspⅠ四种酶进行限制性内切酶反应,区分鉴别弱毒疫苗与野毒,研究了广东地区毒株的遗传多样性。在所获得的12个毒株中有8个毒株的酶切图谱为1-1-4-1,而HUADU株、HD2株的图谱为1-1-4-2,HY2株为1-1-2-1,ZC株为1-2-4-1；据资料
免疫胶体金技术是80年代发展起来的固相标记免疫测定技术,具有单份测定、简单快速、特异敏感等特点。已在被动凝集试验、光镜染色、免疫印迹、免疫斑点渗滤法以及免疫层析技术中得到了应用。最近几年关于免疫金技术在动物医学临床诊断方面的应用也有报道。用胶体金标记提纯后的猪PRRSVIgG,建立了一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。关于用胶体金标记提纯
猪瘟与伪狂犬病是严重危害养猪业的两种疫病。猪瘟与伪狂犬病病毒引起成年猪的混合感染造成的危害更加严重.我们在一份经RT-PCR扩增猪瘟病毒阳性的病料接种PK-15细胞分离猪瘟病毒时,病料接种细胞40h后观察到细胞变圆等细胞病变,接种细胞50h后在仅出现细胞病变但细胞未脱落时用丙酮固定,通过间接免疫荧光实验观察到猪瘟病毒特异的绿色荧光.经电镜观察,设计特异引物PCR扩增,以及动物实验证明引起细胞病变的
2006年8月份以来,本市猪群中出现了以发热、全身皮肤发红或发绀、呼吸困难、食欲减少或废绝、发病率和死淘率高为主要临床症状的疫病,病程15-22天.通过流行病学调查、门诊病例的病理及病原学检查,查找出了蓝耳病毒变异株是我市猪高热病的病原,通过采取行之有效的防控措施,最低限度的减少了高热病对本市养猪业的危害。门诊从2006年8月8日接到第一个病例至12月21日接到最后一个病例,共接诊散养户和规模猪场
猪高热综合症以无名高热、皮肤发红、耳朵发绀、呼吸困难等病症为主要临床特征.2001年入夏后到今年夏季,连续几年来东阳市内外和省内外均有不同程度存在着大面积暴发猪高热综合症。流行初期主要是以生长猪感染发病死亡为主,其后育肥猪、保育仔猪、哺乳仔猪、母猪、后备母猪都会发生。目前,综合的防控措施是加强猪场防疫,改善猪群的生存条件,从环境、营养、免疫、保健等多个方面综合提高猪群的自身抵抗力,做到不发病或减少
2006年5月份以来,我国南方省份相继发生大面积生猪疫情,一些地方出现了大量生猪死亡,涉疫面广,损失较为严重.疫情也波及我市,部分散养和小型专业户生猪感染发病,全市共感染发病生猪近2000头,死亡600余头.经专家诊断,该病是以猪瘟为主的多种疫病混合感染而致,经过综合防治防控,生猪发病的势头得到了遏制,没有出现大面积死亡现象。本文论述了江西九江市这次发生的"猪高热病"原因和应对措施。
根据Genbank发表的核酸序列,分别设计合成流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒的特异引物,应用PCR(或RT-PCR)分别扩增各病毒的特异片断,并克隆到pMD18-TSimple Vector构建重组质粒,用于各病毒探针的制备.将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素膜上,制备成低密度基因芯片.在多重PCR过程中,用生物素标记的dUTP(Bio-11-dUTP)对待检样
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