【摘 要】
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目的 建立接近环境实际暴露水平的炭黑纳米颗粒致呼吸道上皮细胞DNA 损伤模型,寻找功能circRNA 并探讨其在炭黑纳米颗粒致人呼吸道上皮细胞DNA 损伤中的分子机制.方法 选择16HBE、BEAS-2B 细胞和BALB/c 小鼠作为研究对象,构建炭黑纳米颗粒致DNA 损伤模型,通过CCK-8、LDH 和ROS 实验检测细胞活力及氧化应激水平.通过ELISA、Western Blot、彗星实验检测
【机 构】
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广州医科大学公共卫生学院,广州,511436
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的 建立接近环境实际暴露水平的炭黑纳米颗粒致呼吸道上皮细胞DNA 损伤模型,寻找功能circRNA 并探讨其在炭黑纳米颗粒致人呼吸道上皮细胞DNA 损伤中的分子机制.方法 选择16HBE、BEAS-2B 细胞和BALB/c 小鼠作为研究对象,构建炭黑纳米颗粒致DNA 损伤模型,通过CCK-8、LDH 和ROS 实验检测细胞活力及氧化应激水平.通过ELISA、Western Blot、彗星实验检测8-OHdG、γ-H2AX 等DNA 损伤指标.通过高通量测序结合q-PCR 挑选差异circRNA.构建circRNA 干扰、过表达研究体系,联合炭黑纳米颗粒暴露,通过流式细胞术、ELISA、Western Blot、免疫荧光、彗星实验,检测circRNA005962 表达改变对细胞周期、ROS、8-OHdG 及γ-H2AX 等DNA 损伤指标的影响.通过RNA pulldown 实验确定circRNA005962 特异性结合蛋白,并通过WesternBlot 及q-PCR 对三者之间的互作关系进行验证.结果 体外实验结果显示,炭黑纳米颗粒可以诱导细胞ROS 水平升高及DNA 氧化损伤发生.体内实验结果表明,在炭黑纳米颗粒暴露组引起小鼠DNA 损伤发生.circRNA005962 在炭黑纳米颗粒暴露组中呈现高表达.circRNA005962 干扰联合炭黑纳米颗粒暴露后,DNA 损伤水平较对照组升高；过表达circRNA005962 联合炭黑纳米颗粒暴露,DNA 损伤水平较对照组降低.RNA pulldown 实验证明circRNA005962 可与RNA 结合蛋白FUS 直接结合,并受FUS 正向调控；circRNA005962 可结合DNA 修复蛋白DNA Lig4 .干扰、过表达circRNA005962 后联合炭黑纳米颗粒暴露后,circRNA005962 可正向调控DNA Lig4 水平.结论 炭黑纳米颗粒暴露可引起16HBE、BEAS-2B 细胞和BALB/c 小鼠DNA 损伤.在炭黑纳米颗粒致16HBE 细胞DNA 损伤过程中,circRNA005962 具有促进DNA 损伤修复的功能.
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