【摘 要】
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兔球虫是危害家兔健康养殖的重要病原之一,转基因技术是深入研究球虫细胞生物学、球虫与宿主相关作用及其开发用做真核表达载体的重要工具.本研究以兔肠艾美耳球虫(Eimeria intestinalis)弱毒株为模式兔球虫,通过子孢子电转染、无球虫兔体内传代和流式分选等系列试验方法和技术,首先建立了兔球虫稳定电转染体系,并获得了稳定表达YFP的转基因E.intestinalis虫株,转基因球虫卵囊在第三次
【机 构】
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浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江,杭州 310021 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江,杭
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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兔球虫是危害家兔健康养殖的重要病原之一,转基因技术是深入研究球虫细胞生物学、球虫与宿主相关作用及其开发用做真核表达载体的重要工具.本研究以兔肠艾美耳球虫(Eimeria intestinalis)弱毒株为模式兔球虫,通过子孢子电转染、无球虫兔体内传代和流式分选等系列试验方法和技术,首先建立了兔球虫稳定电转染体系,并获得了稳定表达YFP的转基因E.intestinalis虫株,转基因球虫卵囊在第三次传代后的发光比率在80％以上,YFP主要表达在球虫细胞核部位；在获得YFP转基因E.intestinalis虫株的基础上,通过无球虫兔感染、荧光显微观察和克粪便球虫卵囊(OPG)计数等系列试验方法和技术,对YFP转基因兔球虫的生活史、繁殖力和免疫原性进行研究.接种后第4-216 h的观察结果显示,E.intestinalis内生发育整个过程主要在空肠中后段和回肠完成,十二指肠和蚓突有少量后期发育阶段虫体(包括配子体、合子和卵囊)寄生；生活史包括4个裂殖生殖阶段和1个有性生殖阶段,每个裂殖生殖阶段的裂殖子有单核和多核之分、裂殖体也有大、小不同的两个类型；在动物试验中,同样数量的孢子化卵囊(5×103个)接种无球虫兔后,YFP转基因E.intestinalis接种兔的平均排卵囊量为2.569× 108±3.328×107/只,繁殖力显著低于野生虫株(p≤0.05),野生虫株接种组兔的平均排卵囊量为1.922× 109±2.069× 108,但YFP转基因E.intestinalis仍具有较强免疫保护力,攻毒保护率为100％,卵囊减排率为62.25％±3.96％,在攻毒保护率、体重和临床症状等方面与野生虫株免疫组无显著差异.综上所述,本研究建立了兔球虫稳定电转染方法,获得了YFP转基因E.intestinalis虫株,并对其生活史、繁殖力和免疫原性进行了系统研究.结果表明,兔肠艾美耳球虫适合用做外源基因真核表达载体.
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