【摘 要】
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目的 主要检测内毒素血症在慢性乙醇摄人大鼠模型中触发肝脏纤维化的作用机制.方法 将24只SD雄性大鼠随机分为乙醇组和对照组,同时喂养等热量的Lieber-Decarli配方的对照饲料和乙醇饲料,喂养10周.采用光度法检测大鼠门静脉血浆脂多糖浓度.采用原位杂交方法检测大鼠肝脏组织中的TLR4 mRNA和TGF-β1 mRNA.针对大鼠肝脏组织连续切片,采用免疫组织化学染色检测成纤维细胞表面抗原(FS
【机 构】
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212001 江苏大学附属医院老年病科 吉林大学白求恩第一医院
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 主要检测内毒素血症在慢性乙醇摄人大鼠模型中触发肝脏纤维化的作用机制.方法 将24只SD雄性大鼠随机分为乙醇组和对照组,同时喂养等热量的Lieber-Decarli配方的对照饲料和乙醇饲料,喂养10周.采用光度法检测大鼠门静脉血浆脂多糖浓度.采用原位杂交方法检测大鼠肝脏组织中的TLR4 mRNA和TGF-β1 mRNA.针对大鼠肝脏组织连续切片,采用免疫组织化学染色检测成纤维细胞表面抗原(FSP)-1和Vimentin以确定肝星状细胞(HSC),检测F4/80确认Kupffer细胞.应用计算机图像分析系统检测FSP-1阳性HSC和TLR4 mRNA阳性细胞的积分光密度值.采用Western印迹法检测大鼠肝脏组织中工型胶原蛋白和α-平滑肌动蛋白.采用RT-PCR法检测IL-1、IL-6、TNF-α和TGF-β1 mRNA.采用HE染色和Masson三色染色法评估肝脏的组织学特点.结果 Masson三色染色法显示,与正常组大鼠相比,乙醇组大鼠出现不同程度的中央静脉周围肝血窦周边纤维化,和Western印迹法检测的Collagen I蛋白表达相一致.免疫组化染色显示,在乙醇组大鼠肝脏组织有大量HSC和部分Kupffer细胞激活,而正常组肝脏仅有少量HSC表达.与正常组大鼠相比,乙醇组大鼠门静脉血浆内毒素浓度明显增加.原位杂交显示,乙醇组大鼠肝脏组织中大量肝细胞,部分HSC和少数Kupffer细胞表达TLR4 mRNA,而正常组大鼠仅见中央静脉周边内皮细胞或数个肝细胞表达TLR4 mRNA.双变量相关分析结果显示,乙醇组肝脏TLR4 mRNA表达强度与门静脉血浆LPS水平呈正相关(r=0.856,P＜0.05).而且乙醇组大鼠肝脏的炎性因子IL-1、IL-6、TNF-α及纤维源性因子TGF-β1基因转录水平较同期对照组增加.结论 慢性乙醇摄入可引起大鼠门静脉血浆LPS浓度明显升高,激活肝脏中HSC和Kupffer细胞上的TLR4信号通路,释放炎性因子和纤维源性因子TGF-β1,协同作用于HSC,使其活化,进一步介导肝脏纤维化.
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