【摘 要】
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目的 探讨亚砷酸钠诱导上皮-间质转化(EMT)过程中肿瘤干细胞(TSC)特性获得在亚砷酸钠(NaAsO2)所致人皮肤角质(HaCaT)细胞恶性转化过程中的作用及其分子机制,为寻找砷化物致癌的早期生物学标志及发现新的防治措施提供新的线索.方法 应用显微镜检测细胞形态；软琼脂集落形成实验和裸鼠致瘤实验检测细胞检测细胞恶性程度和致瘤性；实时荧光定量PCR和Western blot分别检测不同恶性程度Ha
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院卫生毒理学系 现代毒理学教育部重点实验室,江苏南京210029
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目的 探讨亚砷酸钠诱导上皮-间质转化(EMT)过程中肿瘤干细胞(TSC)特性获得在亚砷酸钠(NaAsO2)所致人皮肤角质(HaCaT)细胞恶性转化过程中的作用及其分子机制,为寻找砷化物致癌的早期生物学标志及发现新的防治措施提供新的线索.方法 应用显微镜检测细胞形态；软琼脂集落形成实验和裸鼠致瘤实验检测细胞检测细胞恶性程度和致瘤性；实时荧光定量PCR和Western blot分别检测不同恶性程度HaCaT细胞的上皮细胞指标E钙黏着蛋白水平,间质细胞指标N钙黏着蛋白和波形蛋白水平,干细胞表面抗原CD34和K5 mRNA表达水平和悬浮细胞集落,NF-κB信号通路的p-IKKβ,p-IκBα和p-NF-κB/RelA及snail水平等指标；并进一步观察NF-κB抑制剂Bay11-7082预处理HaCaT细胞或IKKβ-siRNA,IKKα-siRNA或NF-κB/RelA-siRNA转染HaCaT细胞后,1.0 μmol· L-1 NaAsO2对HaCaT细胞以上指标的影响.结果 1.0 μmol· L-1 NaAsO2处理细胞20代时引起细胞形态发生间质样改变；细胞粘附能力下降,上皮细胞指标E钙黏着蛋白水平降低,而间质细胞指标N钙黏着蛋白和波形蛋白水平以及干细胞表面抗原CD34和K5mRNA表达升高,细胞能够形成悬浮细胞集落,且随NaAsO2处理时间延长,上述改变越明显；1.0 μmol·L-1 NaAsO2处理细胞10代时,引起HaCaT细胞经典NF-κB信号通路的p-IKKβ,p-IκBα和p-NF-κB/RelA水平均升高,snail水平也升高,且随NaAsO2处理时间延长,上述改变越明显；1.0 iμmol· L-1 NaAsO2急性处理引起HaCaT细胞snail水平升高,并具有一定的时间-效应关系；阻滞经典NF-κB信号通路可抑制1.0 μmol· L-1 NaAsO2急性处理所致HaCaT细胞snail水平升高；阻滞NF-κB可抑制1.0 μmol·L-1 NaAsO2慢性处理所致HaCaT细胞E钙黏着蛋白水平和细胞粘附能力下降及N钙黏着蛋白,波形蛋白,CD34和K5水平升高,抑制细胞形态发生间质样改变,抑制细胞悬浮集落形成能力和致瘤性.结论 经典NF-κB信号通路激活而引起snail水平升高在低浓度NaAsO2慢性处理所致HaCaT细胞EMT和TSCs特性获得及恶性转化过程中具有重要作用.
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