【摘 要】
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【目的】探究恶性腹水形成过程中Th1细胞在腹水中如何聚集及其来源,为恶性腹水的发生发展提供一种新的免疫机制,有望成为临床治疗恶性腹水的一种新方法。【方法】一、临床患者腹水标本收集分析收集武汉协和医院2018年10月至2020年10月期间患者腹水及外周血标本,提取其中Th1细胞,标记CD4、IFN-γ、CXCR3和CCR5四个指标进行流式细胞术检测,并留存腹水及外周血上清检测相关趋化因子含量。二、动
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【目的】探究恶性腹水形成过程中Th1细胞在腹水中如何聚集及其来源,为恶性腹水的发生发展提供一种新的免疫机制,有望成为临床治疗恶性腹水的一种新方法。【方法】一、临床患者腹水标本收集分析收集武汉协和医院2018年10月至2020年10月期间患者腹水及外周血标本,提取其中Th1细胞,标记CD4、IFN-γ、CXCR3和CCR5四个指标进行流式细胞术检测,并留存腹水及外周血上清检测相关趋化因子含量。二、动物模型制备及分析1、使用250g左右SD大鼠制备Walker-256恶性腹水模型和四氯化碳所致肝硬化门脉高压性腹水,收集脏层、壁层腹膜,对其腹水和外周血中Th1细胞标记CD4、IFN-γ、CXCR3和CCR5四个指标进行流式细胞术检测,并留存腹水及外周血上清检测相关趋化因子含量。2、使用20g左右C57BL/6小鼠制备H22、S180两种小鼠恶性腹水模型,收集脏层、壁层腹膜,并对其腹水和外周血中Th1细胞标记CD4、IFN-γ两个指标进行流式细胞术检测,分析结果。三、CXCR3基因敲除小鼠构建及繁殖自公司购买CXCR3基因敲除杂合子小鼠,雌雄比例2:1合笼后,待下一代出生,使用PCR—琼脂糖凝胶电泳法进行基因鉴定,得到纯合子后进一步繁殖,直至得到足够数量纯合子小鼠进行试验。四、CXCR3基因在Th1细胞由外周血趋化到腹水中的作用选择体重、周龄接近的CXCR3-/-小鼠和C57BL/6小鼠,制备恶性腹水模型。分析比较两者之间腹水和外周血中Th1细胞比例,及脏层、壁层腹膜中Th1细胞的数量,来探讨CXCR3基因在Th1细胞由外周血趋化到腹水中的作用。【结果】1、通过对腹水病人、大鼠腹水模型的腹水和外周血中Th1细胞流式检测结果进行分析,发现当腹水与外周血中Th1比例差值越大时,CXCR3、CCR5双阳性的Th1细胞占外周血中Th1比例越高,两者之间具有线性相关关系。2、CXCR3-/-小鼠恶性腹水模型和C57BL/6小鼠恶性腹水模型相比,腹水、外周血中Th1细胞比例差值明显降低。3、CXCR3-/-小鼠与C57BL/6小鼠恶性腹水模型相比脏层腹膜中Th1细胞减少,壁层腹膜差异不明显。在大鼠腹水模型中,与正常大鼠和大鼠良性腹水模型相比,大鼠恶性腹水模型脏层腹膜Th1细胞明显增多,壁层腹膜无明显差异。【结论】在恶性腹水形成中,腹水中显著增加的Th1细胞是由腹水中升高的趋化因子,通过Th1细胞表面趋化因子受体CXCR3趋化Th1细胞通过脏层腹膜从血液进入到腹水中。
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