论文部分内容阅读
目的先天性巨结肠(Hirschsprung’s disease, HD)是一种先天性疾病,发病率为1／5000,本病以肠道不同长度的局部神经节细胞缺失为主要病理特征。临床上表现为功能性慢性肠梗阻,这是由于局部丧失正常的舒缩功能导致肠管不能将肠内容物正常排出。目前的研究已经证实先天性巨结肠是一种肠神经系统(Entericnervous system, ENS)发育异常的疾病,是由于胚胎期神经嵴干细胞沿肠壁迁移、分化过程及在肠壁内定位成熟出现障碍而导致的。肠神经系统(ENS)是外周神经系统的一部分,在很大程度上独立于中枢神经系统,又与其非常相似。负责协调肠道复杂的活动方式。ENS可以监测管腔和肠壁的状态,做出适当回应,激活内在反射,产生混合与推进蠕动运动和改变血液流量以及分泌水和电介质。大多数的肠神经神细胞来自起源于神经管1-7体节的迷走神经嵴干细胞,不同的迷走神经嵴细胞分布到不同区域的肠管。一小部分前肠神经细胞也是起源于后迷走区的前干神经嵴细胞。整个过程从胚胎第六周开始到第十二周时完成。Netrin-1是Netrins家族中的一个重要成员。Netrin-1作为神经轴突导向因子既能定向诱导神经轴突生长,也在肠神经嵴干细胞的迁移过程中发挥重要的作用。目前有关Netrin-1在肠神经系统的研究集中在动物的胚胎学方面,尚无有关Netrin-1在人类肠道表达、分布的报道。本研究的目的是观察Netrin-1在HD患者正常段结肠和痉挛段结肠道中的分布、表达是否存在差异,从而进一步探讨其在HD发病机制中所起的作用。方法一、病例与标本收集2008年1月—2009年10月本院病理科36例小儿先天性巨结肠石蜡标本,其中男性32例、女性4例,年龄1月-5岁。其中长段型5例,短段型例4例,常见型27例。这些患儿均为散发、无HD家族遗传病史。二、实验试剂1、Netrin-1(H-104):sc-20786多克隆抗体购自美国SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY公司。2、SP试剂盒及DAB显色剂购自北京中杉金桥有限公司。三、实验方法将36例HD患儿的正常段肠管与痉挛段肠管分为对照组和实验组,采用抗Netrin-1多克隆抗体免疫组织化学方法检测netrin-1在各组中的分布及表达。采用SSPS13.0 for windows统计软件进行统计学处理。将对照组、实验组中肠壁肌层、粘膜层netrin-1的表达分别进行差异性检验,检验采用t检验。结果在对照组(正常段)肠管中肌层(纵肌、环肌)、肌间神经节及粘膜层均见netrin-1表达,实验组(痉挛段)中肌层及粘膜层亦可见netrin-1表达,两组间netrin-1的表达强度进行差异性检验,差异无统计学意义(ρ>0.05)。结论本研究Netrin-1在HD患儿正常段和痉挛段肠管的肌层、粘膜层表达在统计学上无显著差异可能说明netrin-1与HD的发生无明显相关性。