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第一部分20例南方汉族散发性激素耐药型肾病综合征儿童NPHS2和WT1基因遗传学变异目的原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)是儿童常见的肾小球疾病,临床表现为大量蛋白尿、低白蛋白血症、高脂血症和不同程度的浮肿。根据患儿对糖皮质激素治疗的反应,PNS被分成激素敏感型肾病综合征(steroid-sensitive nephrotic syndrome,SSNS)和激素耐药型肾病综合征(steroid-resistant nephrotic syndrome,SRNS)。大部分PNS患儿对激素敏感,预后良好;然而,大约10%～20%的PNS患儿对激素耐药,其中很多逐渐进展至终末肾(end-stage renal disease,ESRD)。近年来,肾脏病遗传学研究证实NPHS2和WT1基因突变可引起SRNS。NPHS2基因突变可引起常染色体隐性遗传型家族性SRNS和散发性SRNS。WT1基因突变可引起孤立性SRNS、Denys-Drash综合征和Frasier综合征等肾脏疾病。目前,国际上有多个对散发性SRNS儿童进行NPHS2或WT1基因突变分析的研究报告。我国对散发性SRNS儿童进行NPHS2基因突变分析的报道不多;尚未见对散发性SRNS儿童进行WT1基因突变分析的报道。为分析中国南方汉族散发性SRNS儿童NPHS2和WT1基因遗传学变异及其特点,我们对20例南方汉族散发性SRNS儿童进行NPHS2和WT1基因突变分析。方法研究对象为20例南方汉族散发性SRNS儿童和50例尿检正常的南方汉族成年人。取所有研究对象外周静脉血3ml,10%枸橼酸钠抗凝,提取基因组DNA。应用PCR、DNA直接测序法、PCR/限制性片断长度多态性分析法进行NPHS2和WT1基因遗传学变异检测。结果在20例SRNS儿童未发现NPHS2和WT1基因致病突变,但检测到2个已报道的NPHS2基因多态性(102G>A和954T>C)和6个WT1基因变异(5’-UTR-7G>T、126C>T、IVS3+16G>A、IVS5-64A>G、903A>G和IVS7-32C>A)。NPHS2基因多态性(102G>A)在20例SRNS儿童中的基因型频率和等位基因频率分别与对照人群中的基因型频率和等位基因频率比较均无显著性差异(P>0.05)。6个WT1基因变异在100条正常染色体中也有检出,表明它们为WT1基因多态性;它们在20例SRNS儿童中的基因型频率和等位基因频率分别与对照人群中的基因型频率和等位基因频率比较均无显著性差异(P>0.05)。IVS5-64A>G为新发现的WT1基因多态性。结论本研究在20例南方汉族散发性SRNS儿童未发现NPHS2和WT1基因致病突变,但发现了2个已报道的NPHS2基因多态性、5个已报道的WT1基因多态性和1个新发现的WT1基因多态性,提示NPHS2和WT1基因突变不是本研究南方汉族散发性SRNS儿童的主要致病原因。第二部分7例汉族慢性肾功能衰竭儿童NPHS2和WT1基因遗传学变异目的慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)是因慢性持久性肾受损、肾单位被破坏功能减退导致肾排泄调节功能和内分泌代谢功能严重受损,从而造成含氮代谢废物在体内潴留、水与电解质、酸碱紊乱,出现一系列相应的症状、体征和并发症,呈不可逆末期肾病变,预后差。CRF是由多因素引起的疾病。近年来的研究表明,遗传因素在CRF发病中起着重要作用。NPHS2、WT1等单基因突变引起的NS患者将逐渐进展到CRF。目前,国际上对CRF儿童进行NPHS2或WT1基因突变分析的研究报告尚不多。我国尚未见对CRF儿童进行NPHS2或WT1基因突变分析的研究报告。为分析汉族CRF儿童NPHS2和WT1基因遗传学变异及其特点,我们对7例CRF儿童进行NPHS2和WT1基因突变分析。方法研究对象为7例因肾小球疾病所致的汉族CRF儿童和50例尿检正常的汉族成年人。分别取7例CRF儿童和50例对照人群的外周静脉血各3ml,10%枸橼酸钠抗凝,提取基因组DNA。应用PCR方法扩增NPHS2和WT1基因的全部外显子及其周围的部分内含子。通过DNA直接测序法和PCR/限制性片断长度多态性分析法对NPHS2和WT1基因进行遗传学变异分析。结果在7例汉族CRF儿童未发现NPHS2和WT1基因致病突变,但检测到2个已报道的NPHS2基因多态性(102G>A和954T>C)和4个WT1基因变异(5’-UTR-7G>T、126C>T、IVS5-9T>C和903A>G)。NPHS2基因多态性(102G>A)在7例CRF儿童与对照人群中的基因型频率和等位基因频率比较无显著性差异(P>0.05)。3个WT1基因变异(5’-UTR-7G>T、126C>T和903A>G)已见文献报道,在100条正常染色体中也有检出,表明它们为WT1基因多态性;它们在7例CRF儿童与对照人群中的基因型频率和等位基因频率比较均无显著性差异(P>0.05)。另外1个WT1基因变异(IVS5-9T>C)未见文献报道,在1例患儿及其父亲(尿检正常)中检出,为杂合变异,而在100条正常染色体中未检出。结论本研究在7例汉族CRF儿童未发现NPHS2和WT1基因致病突变,但发现了2个已报道的NPHS2基因多态性、3个已报道的WT1基因多态性和1个新发现的WT1基因变异,提示NPHS2和WT1基因突变不是本研究7例汉族CRF儿童的主要致病原因。