炎症是机体对致炎因子刺激产生的防御作用,但长期过度的炎症反应会影响机体正常代谢过程,如类风湿性关节炎、炎性肠病、动脉粥样硬化、脑卒中、糖尿病和肿瘤等。因此,抑制机体过度的炎症反应对于预防和控制这些疾病的发生发展具有重要意义。炎症反应从启动到终止的整个过程中,巨噬细胞都起着重要的作用。本论文以LPS刺激的小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞系进行体外炎症造模,对球毛壳菌素Vb和西贝母碱苷的体外抗炎作用进行研究。本文首先用不同浓度的球毛壳菌素Vb和西贝母碱苷作用于LPS刺激的RAW 264.7细胞,采用MTT法筛选细胞活力;用一氧化氮试剂盒及ELISA试剂盒分别测定NO、TNF-α和IL-6的释放量;采用Western blot法测定i NOS和COX-2蛋白表达;q RT-PCR法测定i NOS、COX-2、促炎细胞因子及抗炎细胞因子m RNA的水平。结果显示球毛壳菌素Vb和西贝母碱苷均能抑制LPS诱导的NO、TNF-α和IL-6的基因表达及释放量,同时能够降低i NOS和COX-2基因表达。西贝母碱苷还能促进抗炎因子IL-10基因表达。以上研究结果表明,球毛壳菌素Vb和西贝母碱苷具有较强的抗炎活性。在此基础上,进一步阐释球毛壳菌素Vb和西贝母碱苷抗炎活性的作用机制。采用q RT-PCR法测定了TLR4介导的My D88依赖和TRIF依赖信号通路上关键蛋白的m RNA转录水平,采用Western blot法测定了MAPK和NF-κB信号通路中关键蛋白的表达。研究结果显示,球毛壳菌素Vb和西贝母碱苷均抑制了LPS诱导的TLR4、My D88和TRIF m RNA水平。同时,在My D88介导的信号通路中,球毛壳菌素Vb可以抑制NF-κB和ERK、JNK、p38 MAPK信号通路,而西贝母碱苷也可抑制NF-κB和ERK、p38 MAPK信号通路,但未检测到对JNK MAPK信号通路影响。此外,由于炎症反应与氧化应激之间关系密切,本文进步一考察了二者之间的作用关系。采用流式细胞术测定细胞内ROS的水平,采用SOD活力检测试剂盒检测细胞SOD酶活力。研究结果显示,球毛壳菌素Vb和西贝母碱苷均能下调LPS引起的ROS剧增,并能增加抗氧化酶SOD的酶活力。初步表明球毛壳菌素Vb和西贝母碱苷也具有较强的抗氧化活性。本研究对球毛壳菌素Vb和西贝母碱苷的抗炎和抗氧化作用效果及其作用机制的研究可为潜在的治疗炎症性疾病的前体药物研发提供理论依据。